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BMSC向神经细胞分化诱导后上清液对MCI大鼠治疗作用的实验研究

作　者: 郭樑
导　师: 李光来
学　校: 山西医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 认知功能障碍骨髓间充质干细胞诱导后上清液 CDK5
分类号: R749.16
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：探讨3代、4代、5代大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导后12h上清液对认知功能障碍大鼠的治疗作用。方法：1、大鼠BMSC的分离、培养和鉴定BMSC采用全骨髓贴壁培养法，用流式细胞仪对选取的第3代BMSC，按/mL水平分别置于5个检测管后加入小鼠抗大鼠CD29抗体、CD44抗体、CD34抗体以及用于对照的IgGI和空白对照进行检测。2、细胞爬片和诱导与鉴定分别取第3、4、5代BMSC进行预诱导，具体方法为：六孔板中加入含1 mmol/LβME和20%胎牛血清的L-DMEM培养液。24 h后吸弃预诱导液。加入bFGF 20 ng/mL和10%胎牛血清。后行免疫细胞化学鉴定。3、实验动物的选择与处理3月龄大鼠十只为正常组，Morris水迷宫行隐蔽平台获得实验确立认知功能障碍大鼠标准：平均潜伏期较正常组延长20％以上者定义为认知功能障碍大鼠。15--22月龄大鼠Morris水迷宫行隐蔽平台获得实验筛选认知功能障碍大鼠40只，随机分生理盐水对照组、3代、4代、5代干细胞传代诱导后12小时上清液治疗组并行行为学检测，后分别海马注射生理盐水、三代、四代、五代干细胞传代诱导后12小时上清液3μl。注射上清后4周4组大鼠进再次行行为学检测。4、免疫组织化学染色测定CDK5表达程度。结果: 1、成功分离培养BMSC，传至3代后,细胞呈旋涡状排列的均一梭形，流式细胞仪检测符合MCS表型特征：检测CD29表达率为（99.7%）、CD44表达率为（99.8%）、CD34表达率为（2.3%）。2、诱导后细胞形态变化与免疫化学鉴定加入预诱导液24h后可以观察到一部分细胞胞膜胞质渐进性向胞核方向集中、收缩,移入bFGF后上述变化更加明显，可见突起形成。各组细胞均有部分细胞NSE阳性，表现为胞浆呈黄棕色，阳性率为42.50±6.40，GFAP染色后各诱导组出现极少量阳性细胞。3、水迷宫实验对注射前后定位巡航实验潜伏期差值行统计学分析，除三代组与五代组之间的差异无统计学意义外，其它任何两组间的差异均具有统计学意义（p<0.05）,三代与五代上清液较四代效果明显。4、各组脑组织边缘系统CDK5表达情况Kruskal-Wallis检验可认为四组CDK5表达情况总体分布不同或不全相同（=32.046，P<0.001）,进一步应用Wilcoxon秩和检验分别对四组行组间两两比较，除三代组与五代组间差异无统计学意义外，余各组间差异均有统计学意义，三代（平均秩和=5.50）与五代（平均秩和=5.50）上清液组较四代（平均秩和=6.00）CDK5表达阳性率低。结论：1、大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导后上清液对MCI大鼠有治疗作用。2、三代与五代上清液对mci大鼠治疗作用强于四代上清液。

BMSC向神经细胞分化诱导后上清液对MCI大鼠治疗作用的实验研究

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