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促进蛋白抗原诱生CD8~+ CTL反应的疫苗佐剂的研究

作　者: 王美菊
导　师: 于三科; 许洪林
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 蛋白抗原 疫苗佐剂 CpG-ODN IL-2 CD8~+CTL 反应
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


CD8+CTL在肿瘤和慢性感染等疾病的治疗中具有重要作用。蛋白或多肽可以在疫苗佐剂辅助下通过交叉提呈和交叉致敏诱生有效的CD8+CTL反应。前期研究结果表明，以鸡卵清蛋白（OVA）为模型抗原、以Al（OH）3+CpG-X1为佐剂免疫小鼠能够诱生较强的CD8+CTL反应。IL-2是一种T细胞生长因子，本研究在Al（OH）3+CpG-X1双佐剂基础上加入IL-2作为佐剂，进一步研究其在蛋白抗原通过交提呈和交叉致敏诱生CD8+CTL反应中的作用。本研究以OVA为模型抗原、以Al（OH）3+CpG-X1为佐剂，通过肌肉注射免疫C57BL/6小鼠，免疫后第4～6天注射不同针次低剂量的IL-2，通过胞内细胞因子染色验证了低剂量的IL-2能够在Al（OH）3+CpG-X1双佐剂基础上进一步促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生抗原特异性CD8+CTL反应。然后在此基础上对IL-2在初次免疫和加强免疫后的注射时间、注射针次和注射剂量进行了优化，结果表明IL-2的最佳注射条件为初次免疫后第5～7天、加强免疫后第2～4天每天注射一针，剂量为10,000IU/针次。为了确定IL-2与Al（OH）3+CpG-X1双佐剂联合使用的必要性，以OVA为模型抗原，分别以CpG-X1、Al（OH）3和Al（OH）3+CpG-X1为佐剂免疫C57BL/6小鼠，并按上述确定的条件注射IL-2，通过胞内细胞因子染色检测抗原特异性CD8+CTL反应。结果表明，IL-2与Al（OH）3+CpG-X1联合使用佐剂效应最强，IL-2与CpG-X1联合使用佐剂效应次之，IL-2与Al（OH）3联合使用佐剂效应最差。前期研究表明CpG-X1单佐剂和Al（OH）3+CpG-X1双佐剂都能够促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生CD8+CTL反应。本研究上述结果表明CpG-X1+IL-2和Al（OH）3+CpG-X1+IL-2也能够有效促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生CD8+CTL反应。因此，本研究通过胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤对这四种诱生CD8+CTL反应的细胞免疫佐剂进行了全面比较研究。结果表明，Al（OH）3+CpG-X1+IL-2佐剂效应最强，CpG-X1+IL-2的佐剂效应次之，CpG-X1和Al（OH）3+CpG-X1佐剂效应最弱。为了研究不同疫苗佐剂促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生的CD8+CTL反应的体内肿瘤治疗效果，本研究用表达OVA的MO5黑色素瘤细胞和EG7胸腺瘤细胞接种未免疫C57BL/6小鼠，第5～7天肿瘤生长至肉眼可见，此时分别用OVA、OVA+Al（OH）3、OVA+CpG-X1和OVA+Al（OH）3+CpG-X1进行免疫，部分小鼠在免疫后第5～7天各注射1针次低剂量IL-2（10,000IU/针次）。肿瘤生长结果表明，Al（OH）3+CpG-X1+IL-2、CpG-X1+IL-2、Al（OH）3+CpG-X1和CpG-X1作为佐剂都能够较好的抑制肿瘤生长并延长小鼠存活时间，而其余组别治疗效果与对照组类似。综上所述，IL-2能够在Al（OH）3+CpG-X1双佐剂基础上进一步促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生有效的CD8+CTL反应。本研究为肿瘤和慢性感染的治疗性疫苗研发奠定了疫苗佐剂基础。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
文献综述  11-18
  第一章 不同佐剂在治疗性疫苗诱生 CD8~+CTL 反应中的应用  11-18
    1.1 CD8~+CTL 的免疫保护性作用  11-12
    1.2 CD8~+CTL 的活化机制  12
    1.3 MHCⅠ类抗原提呈途径  12-13
      1.3.1 经典的 MHCⅠ类抗原提呈途径  12
      1.3.2 非经典的 MHCⅠ类抗原提呈途径  12-13
    1.4 通过疫苗诱生 CD8~+CTL 反应  13-14
    1.5 CPG-ODN 促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生 CD8~+CTL  14-15
    1.6 IL-2 在免疫治疗中的作用  15-17
      1.6.1 IL-2 简介  15-16
      1.6.2 IL-2 的应用  16-17
    1.7 治疗性疫苗的展望  17-18
试验研究  18-46
  第二章 IL-2 促进蛋白抗原诱生 CD8~+CTL 反应的研究  18-46
    2.1 材料  18-21
      2.1.1 主要仪器  18-19
      2.1.2 主要试剂  19-20
      2.1.3 常用溶液配方  20
      2.1.4 细胞系  20
      2.1.5 试验动物  20-21
    2.2 方法  21-23
      2.2.1 疫苗的配制  21
      2.2.2 动物免疫  21
      2.2.3 制备小鼠脾细胞悬液  21
      2.2.4 胞内细胞因子染色  21-22
      2.2.5 体内 CTL 杀伤  22
      2.2.7 肿瘤治疗模型  22-23
    2.3 结果  23-44
      2.3.1 IL-2 对 CD8~+CTL 反应的影响  23-25
      2.3.2 IL-2 不同注射条件对 CD8~+CTL 反应的影响  25-33
      2.3.3 IL-2 与不同疫苗佐剂联合使用对 CD8~+CTL 反应的影响  33-36
      2.3.4 不同疫苗佐剂对 CD8~+CTL 反应的影响  36-41
      2.3.5 不同佐剂在肿瘤治疗性疫苗中的作用  41-44
    2.4 讨论  44-46
结论  46-47
参考文献  47-52
致谢  52-53
作者简介  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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