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一株海洋放线菌抗生物质的分离和结构初步分析

作　者: 李冰
导　师: 蔡敬民
学　校: 安徽农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 抗菌物质 鉴定 Plackett-Burman 响应面分析 分离纯化
分类号: S917.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 28次
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内容摘要


对厦门周边海域采集的样品采用稀释涂平板法分离、纯化、保藏各种海洋微生物，对筛选出的一株具有广谱抗菌活性的海洋放线菌进行研究，经过形态特征、培养特征、生理生化特征及16S rDNA鉴定为达松维尔拟诺卡菌。为了提高抗菌物质的产量，采用响应面法对DY2242菌株的发酵培养基进行优化。首先利用单因素实验考查了不同介质、碳源、氮源对菌株DY2242的影响，在此基础上运用Plackett-Burman试验设计方法筛选出影响产抗菌物质的三个主要因素：NaCl、麦芽糖和NaNO3浓度。用最陡爬坡实验逼近最大响应区域，再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析方法确定主要因素的最优浓度：氯化钠浓度为2.08%，麦芽糖浓度为3.08%，NaNO3浓度为0.875%。在培养基的优化条件下，抗菌物质的抑菌圈直径由最初的25.5mm上升到31mm，增加约24%。此后，再对发酵条件进行优化，表明起始最佳pH7.0，最佳接种菌龄72h，最佳接种量5%，最佳装液量为70ml（250ml三角瓶），最佳培养温度为28℃，最佳培养时间5天，在此培养条件下进行发酵，抗菌物质的抑菌圈直径由最初的25.5mm上升到33.5mm，增加约31.4%。通过菌株DY2242抗菌物质稳定性的实验，表明其对UV、pH均具有较好的稳定性，抗菌物质在高于100℃时部分失活。通过Sephadex LH-20柱色谱分离后，经抗菌活性检测发现一个较强的活性峰。将此峰的洗脱液各组分进行薄层色谱分析，选取斑点清晰且单一的组分进行气相色谱-质谱联用分析，总离子流图表明该组分成分单一，根据质谱图谱与标准谱库比对，初步判断该组分为邻苯二甲酸二丁酯（DBP）。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-9
文献综述  9-16
1 引言  16-17
  1.1 研究意义和理论依据  16
  1.2 本实验拟解决的问题  16-17
2 材料和方法  17-26
  2.1 材料  17-19
    2.1.1 仪器设备和试剂  17-18
    2.1.2 菌种  18
    2.1.3 培养基  18-19
  2.2 方法  19-26
    2.2.1 抗菌活性菌株筛选  19
    2.2.2 抗菌活性的测定  19-20
    2.2.3 放线菌 DY2242 的鉴定  20-21
    2.2.4 放线菌 DY2242 分子鉴定  21
    2.2.5 菌株 DY2242 发酵培养基优化  21-23
    2.2.6 菌株 DY2242 发酵条件的优化  23-24
    2.2.7 DY2242 抗菌谱的测定  24
    2.2.8 发酵液抗菌物质稳定性试验  24
    2.2.9 抗菌物质的分离、纯化和鉴定  24-26
3 结果与分析  26-45
  3.1 抗菌活性菌株的筛选  26
  3.2 放线菌 DY2242 的鉴定  26-30
    3.2.1 放线菌 DY2242 的形态观察  26
    3.2.2 放线菌 DY2242 的培养特征  26-27
    3.2.3 DY2242 生理生化特性  27-28
    3.2.4 DY224216S rDNA 鉴定  28-30
  3.3 菌株 DY2242 发酵培养基优化  30-37
    3.3.1 单因素优化培养介质、碳、氮源  30-32
    3.3.2 Plackett-Burman 试验筛选重要因素  32-33
    3.3.3 最陡爬坡实验  33
    3.3.4 响应面设计最优培养基组成  33-37
  3.4 菌株 DY2242 发酵条件的优化  37-41
    3.4.1 pH 对抗菌物质抑菌效果的影响  37-38
    3.4.2 接种菌龄对抗菌物质产量的影响  38
    3.4.3 接种量对抗菌物质抑菌效果的影响  38-39
    3.4.4 装液量对抗菌物质抑菌效果的影响  39
    3.4.5 发酵温度对抗菌物质抑菌效果的影响  39-40
    3.4.6 发酵条件优化前后对比  40-41
  3.5 DY2242 抗菌谱的测定  41
  3.6 发酵液抗菌物质稳定性试验  41-42
    3.6.1 pH 稳定性  41
    3.6.2 UV 稳定性  41-42
    3.6.3 热稳定性  42
  3.7 抗菌物质的分离、纯化和鉴定  42-45
    3.7.1 葡聚糖凝胶 Sephadex LH-20 柱色谱分离各组分的抑菌活性  42-43
    3.7.2 活性成分分析结果  43-45
4 讨论  45-47
  4.1 放线菌 DY2242 菌种鉴定  45
  4.2 放线菌 DY2242 的发酵条件的优化  45
  4.3 菌株 DY2242 抗菌物质稳定性研究  45
  4.4 菌株 DY2242 活性成分的研究  45-47
5 结论  47-48
参考文献  48-55
致谢  55-56
作者简介  56
在读期间发表的学术论文  56

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