学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

一氧化氮合酶/一氧化氮途径对降钙素基因相关肽合成与释放的影响

作　者: 陈清泉
导　师: 李元建
学　校: 中南大学
专　业: 心血管药理
关键词: 高血压 背根神经节神经元细胞 降钙素基因相关肽 非对称二甲基精氨酸 一氧化氮 辣椒素 吴茱萸次碱 花生四烯酸乙醇胺 辣椒素受体 丝裂原活化蛋白激酶
分类号: R544.1
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
下　载: 468次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


第一章高血压大鼠一氧化氮合酶抑制物浓度与CGRP表达的变化研究背景高血压作为一种常见的心血管疾病，对人类健康影响极大，有效的降压可显著降低患者的死亡率。在高血压疾病的进程中，常伴随着血压调节的生理因素的异常，包括交感和感觉神经系统活性改变，血管活性物质（如一氧化氮）水平的异常等。一氧化氮（NO）是一种内源性的血管舒张因子，NO合成与代谢受多种因素调节，临床研究发现，高血压患者血中NO浓度降低，可能与高血压患者体内一氧化氮合酶抑制物水平增加有关。非对称二甲基精氨酸（ADMA）是一种内源性的一氧化氮合酶（NOS）抑制物，是一种新发现的心血管疾病危险因子。降钙素基因相关肽（CGRP）是一种感觉神经递质，广泛分布于心血管组织。外周循环中的CGRP主要由背根神经节（DRG）的神经元细胞合成并释放。研究发现，高血压患者血浆中CGRP的浓度显著降低，CGRP可能在高血压疾病的发生发展中起着重要的作用。CGRP的释放可受多种内源性活性物质包括NO的调节。基于ADMA竞争性抑制NOS，降低NO水平，我们推测高血压动物CGRP浓度的降低可能与ADMA升高有关。因此，本实验在自发性高血压大鼠和体外培养的DRG神经元细胞上研究了ADMA与CGRP的相互作用。方法实验一：自发性高血压大鼠（SHR）ADMA与CGRP的关系实验分为3组：①WKY对照组；②SHR组；③SHR+L-精氨酸组（SHR大鼠给予L-精氨酸1g／kg／day处理14天）。处理结束时，测定大鼠血压（尾动脉袖套法测收缩压），取血浆测ADMA（高效液相色谱法），CGRP（放射免疫法）及NO（硝酸还原酶法）的含量，并取背根神经节测CGRP含量及以RT-PCR分析CGRP mRNA表达水平。实验二：培养的背根神经节神经元细胞ADMA对CGRP合成与释放的影响取出生3天内的大鼠背根神经节，体外培养背根神经节神经元细胞，实验分组：①对照组；②低中高浓度ADMA处理组；③高浓度ADMA+L-精氨酸组；④L-精氨酸对照组。测定培养上清液中CGRP及NO浓度，并分析神经元细胞CGRP mRNA表达水平。结果动物实验结果显示，SHR组大鼠血压显著高于WKY组，给予L-精氨酸处理可降低血压；SHR组血浆ADMA含量高于WKY组，CGRP和NO含量低于WKY组，且SHR组背根神经节中CGRP的含量及CGRP mRNA（包括CGRP-α及β）表达水平亦显著低于WKY组；给予L-精氨酸处理可升高SHR组体内NO和CGRP的含量及上调CGRP的表达，但对ADMA无明显影响。在培养的背根神经节神经元细胞，ADMA可显著抑制CGRP的合成与释放，并减少NO的生成，其作用可为L-精氨酸逆转。结论高血压大鼠CGRP表达与释放降低可能与ADMA升高降低NO水平相关。第二章辣椒素受体对CGRP表达的调节及机制研究背景降钙素基因相关肽（CGRP）是辣椒素敏感的感觉神经的主要递质，由37个氨基酸残基组成，背根神经节神经元是合成CGRP的主要部位。CGRP的合成与释放受多种因素的调节，包括NGF、NO、某些炎症因子、辣椒素等，其中分布于感觉神经的胞体或末梢膜上的辣椒素受体（vanilloid receptor subtype 1，VR1）是调节CGRP释放的关键受体。VR1可被多种刺激因素激活，如芳香草酸化合物、高温和氢离子等。花生四烯酸乙醇胺（anandamide，ANA）是体内存在VR1的内源性配体，辣椒素及中药吴茱萸的有效成分吴茱萸次碱也可激活辣椒素受体。激活VR1引起二价阳离子（主要是钙离子）内流，可导致CGRP的释放。我室及其他研究者证实，ANA，辣椒素及吴茱萸次碱均可刺激感觉神经末梢CGRP的释放，并可为辣椒素受体特异性阻断剂辣椒辣素所抑制。然而，这些研究多为在体动物和离体器官实验结果，其机制也尚不清楚。一氧化氮（NO）作为一种重要的气体分子，经一氧化氮合酶（NOS）催化合成。NOS包括三种亚型：nNOS，iNOS和eNOS。其中神经元细胞中NO主要由nNOS合成，免疫组化分析发现nNOS、CGRP与VR1呈现一种共分布，且已有研究显示抑制NO的生成可显著降低辣椒素引起的CGRP释放。本研究拟在体外培养的背根神经节神经元细胞，观察VR1受体对于CGRP合成与释放的调节，并分析NO是否参与这一过程。方法实验一：VR1对CGRP合成与释放的影响培养新生大鼠背根神经节神经元细胞，给予不同剂量辣椒素(10-8，10-7，10-6M)、ANA(10-8，10-7，10-6M)、吴茱萸次碱(10-7，10-6，10-5M)处理，以放射免疫法检测细胞培养上清液中CGRP的含量，并通过RT-PCR分析CGRP mRNA水平。实验二：辣椒素促CGRP合成与释放的机制培养新生大鼠背根神经节神经元细胞，实验分组：①对照组；②辣椒素(10-6M)处理组；③辣椒素+EGTA组；④辣椒素+L-NAME组；⑤EGTA组；⑥L-NAME组。检测培养上清液中CGRP（放射免疫法）及NO（硝酸还原酶法）的含量，通过RT-PCR分析CGRP及nNOS mRNA的表达水平，并以Western-blot分析nNOS在神经元内的蛋白表达水平。结果在培养的背根神经节神经元细胞，辣椒素，花生四烯酸乙醇胺及吴茱萸次碱均可浓度依赖性上调DRG神经元细胞CGRP mRNA表达水平和升高培养液中CGRP的含量，其效应可被高浓度的辣椒辣素预处理所抑制。Ca2+鳌合剂EGTA与NOS抑制剂L-NAME可抑制辣椒素的促CGRP合成与释放效应。辣椒素可增加细胞培养液中NO含量，其作用可为EGTA和L-NAME抑制。RT-PCR及Western-blot分析显示，辣椒素可浓度依赖性的增加神经元细胞中nNOS mRNA和蛋白水平的表达，其作用亦可被EGTA所阻断。结论激动辣椒素受体VR1可促进背根神经节神经元细胞中CGRP的合成与释放，辣椒素介导的CGRP合成与释放涉及NO途径。第三章NO调节CGRP表达涉及ERK信号转导途径研究背景降钙素基因相关肽（CGRP）为37个氨基酸的神经多肽，具有广泛的生物学作用，不仅在维持循环稳定起重要作用，还参与伤害性信息的传递和痛觉过敏。背根神经节的神经元细胞是循环系统中CGRP的主要来源。CGRP的合成与释放受多种活性物质（包括NO）的调节。一氧化氮（NO）是机体重要的生物信使分子和神经调质。在神经系统，NO可参与多种生理功能和病理生理过程，包括对神经源性CGRP释放的调节。在第一部分实验也证明，SHR大鼠血中CGRP浓度降低可能与ADMA升高，减少NO生成有关。此外，在我们的第二部分结果及其他研究者的研究中也证明辣椒素所诱导的CGRP合成与释放涉及NO途径。然而，NO对CGRP合成与释放的调节机制尚未明了。已知NO可通过cGMP依赖性和非依赖性的机制参与细胞体内多种生物学过程。在神经元细胞中，NO能活化丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）。研究报道，促CGRP合成的神经生长因子（NGF）或吗啡均可活化神经元细胞中MAPK信号转导通路，而阻断ERK的活化可显著抑制CGRP的生成。这提示NO促进CGRP合成与释放可能涉及ERK信号转导途径。本实验在培养的背根神经节神经元细胞中，观察了NO供体SNP及NOC-18对于细胞CGRP表达和释放的影响，并分析ERK信号传导通路在这一过程中的作用。方法实验一：NO对CGRP合成与释放的影响培养新生大鼠背根神经节神经元细胞，给予不同剂量NO供体SNP（0.1，1，10μmol／L）、NOC-18（0.1，1，10μmol／L），以放射免疫法检测细胞培养上清液中CGRP（放射免疫法）的含量，并通过RT-PCR分析CGRP mRNA水平。实验二：ERK活化对NO促CGRP合成与释放的影响培养新生大鼠背根神经节神经元细胞，实验分组：①对照组；②不同浓度一氧化氮供体NOC-18（0.1，1，10μmol／L）处理组：③NOC-18（10μmol／L）+U0126（10μmol／L）组；④U0126组。检测培养上清液中CGRP（放射免疫法）的含量，RT-PCR分析神经元内CGRP mRNA的表达水平，并以Western-blot分析phospho-ERK蛋白表达水平。结果SNP和NOC-18可浓度依赖性促进DRG神经元细胞中CGRP合成与释放，ERK抑制剂U0126可抑制NOC-18的促CGRP效应。Western-blot结果显示，NOC-18可时间与浓度依赖性的增加神经元细胞中ERK的活化，且其作用可被U0126所阻断。结论NO可促进背根神经节神经元细胞CGRP的合成与释放，其机制与活化ERK信号转导途径相关。

全文目录


中文摘要  4-13
英文摘要  13-23
缩略词  23-24
第一章 高血压大鼠一氧化氮合酶抑制物浓度与CGRP表达的变化  24-45
  1.前言  24-25
  2.材料与方法  25-30
  3.实验结果  30-38
  4.讨论  38-40
  5.结论  40-41
  6.参考文献  41-45
第二章 辣椒素受体对CGRP表达的调节及机制  45-72
  1.前言  45-46
  2.材料与方法  46-50
  3.实验结果  50-66
  4.讨论  66-68
  5.结论  68-69
  6.参考文献  69-72
第三章 NO调节CGRP表达涉及ERK信号转导途径  72-90
  1.前言  72-73
  2.材料与方法  73-77
  3.实验结果  77-84
  4.讨论  84-86
  5.结论  86-87
  6.参考文献  87-90
综述  90-101
致谢  101-102
附录  102-103

相似论文

  1. P38MAPK与caspase-3在大鼠胃缺血再灌注中的表达及其相关性研究,R656.6
  2. P38MAPK对高糖诱导肾小球系膜细胞MMP-9和TIMP-1表达的影响,R587.2
  3. 内皮型一氧化氮合酶基因对心肌梗死大鼠心室重塑的影响,R542.22
  4. MAPK在斑马鱼卵母细胞第一次减数分裂恢复过程中的生理功能,Q343
  5. 玉米促丝裂原活化蛋白激酶家族基因的电子克隆及生物信息学分析,S513
  6. 补体C5a在细菌感染性炎症中对IL-8分泌的调节研究,R392.1
  7. 润肤止痒乳对角质形成细胞增殖的影响及对P38MAPK信号通道和VEGF含量的干预作用,R285
  8. PKC-TGF-β 1-p38MAPK信号传导通路及FN表达在糖尿病大鼠肺损伤中的作用机制,R587.1
  9. MG132对早期糖尿病肾病大鼠ERK1/2信号通路的作用研究,R587.1
  10. p38MAPK对高糖诱导肾小球系膜细胞MMP-2/TIMP-2及Ⅳ型胶原表达的影响,R587.2
  11. 乌司他丁对脓毒症心肌损伤的保护作用及机理探讨,R631
  12. HLA-G低表达通过MAPK信号通路影响滋养细胞生物学行为,R714.2
  13. SB202190对KA诱导的难治性癫痫大鼠海马神经元的保护作用,R742.1
  14. EGCG对AngⅡ引起内皮细胞骨架重排的逆转作用机制,R285.5
  15. 基质细胞衍生因子-1β对高脂诱导心肌细胞凋亡的预防作用及机制,R587.1
  16. 白芍总苷对实验性结肠炎的影响及机制,R285.5
  17. 针刺调控胃动力作用中Cajal细胞生物学改变及其部分细胞信号转导途径研究,R245
  18. 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路与人精子活动力的相关性研究,R698.2
  19. p38MAPK通路在自体静脉桥血管移植后再狭窄的作用研究,R541.4
  20. 胃泌素及其受体在人食管腺癌细胞增殖中的作用,R735.1
  21. p-p38和uPA在胃癌组织中的表达及其意义,R735.2

中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血压异常 > 高血压
© 2012 www.xueweilunwen.com