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润肤止痒乳对角质形成细胞增殖的影响及对P38MAPK信号通道和VEGF含量的干预作用

作　者: 黄文娟
导　师: 刘丽芳
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中医外科学
关键词: 润肤止痒乳 角质形成细胞 细胞增殖 P38丝裂原活化蛋白激酶信号通道 血管内皮生长因子
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：观察润肤止痒乳对体外培养人表皮角质形成细胞增殖的影响,探讨润肤止痒乳对角质形成细胞中P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路的调控及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,并研究P38MAPK信号通路与VEGF表达两者的相关性。方法：1.采用改良无血清培养技术,体外分离培养正常人表皮角质形成细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,并进行角质形成细胞免疫细胞化学鉴定。2.四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT法)测润肤止痒乳对体外培养的角质形成细胞无细胞毒副作用的浓度范围。3.在无毒浓度范围内对倍稀释润肤止痒乳,取4个浓度组,另外加他扎罗汀组、抑制剂组和空白对照组,MTT法检测各组细胞增殖情况。4.蛋白质免疫印迹法(western blot)测定磷酸化P38含量变化；酶联免疫吸附法(ELISA)检测VEGF分泌的变化。结果：1.体外培养的细胞具有角质形成细胞的形态,经角蛋白染色阳性。2.润肤止痒乳在0-0.4855g/ml浓度范围内对角质形成细胞无毒副作用；与空白对照组比较,润肤止痒乳在0.4g/ml、0.2g/ml和0.1g/ml浓度时对角质形成细胞有显著的抑制增殖的作用(P<0.01),在0.05g/ml浓度时有促进细胞增殖的作用,但差别无统计学意义(P>0.05)。与他扎罗汀组比较,在0.4g/ml浓度时对细胞增殖的抑制作用差别无显著意义(P>0.05)。3.与阴性对照组比较,药物浓度在0.4g/ml、0.2g/ml时,磷酸化P38蛋白表达明显降低(P<0.01)；当浓度在0.1g/ml时,蛋白表达降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,他扎罗汀组与抑制剂组的蛋白表达均显著降低(P<0.01)。4.与空白对照组比较,当药物浓度在0.4g/ml和0.2g/ml时VEGF的分泌明显减少(P<0.01)；当药物浓度在0.1g/ml时,VEGF的分泌减少(P<0.05)；抑制剂组对VEGF的分泌较空白组没有显著差异(P>0.05)。结论：1.润肤止痒乳在一定浓度范围内可抑制角质形成细胞的增殖作用,其抑制作用于他扎罗汀无差异。2.润肤止痒乳治疗银屑病的机制之一可能是通过抑制P38MAPK信号通道的激活,从而起到抑制角质形成细胞增殖的作用。3.润肤止痒乳可减少VEGF的分泌,但其分泌与P38MAPK信号通道的激活无关。

全文目录


缩略词  7-8
中文摘要  8-10
ABSTRACT  10-13
引言  13-15
第一部分 材料和方法  15-28
  1 主要仪器及试剂  15-18
    1.1 主要仪器  15
    1.2 主要试剂  15-16
    1.3 实验药物制备  16-17
    1.4 实验试剂配制  17-18
  2 实验方法及步骤  18-27
    2.1 角质形成细胞原代培养  18-19
    2.2 细胞计数  19-20
    2.3 细胞传代  20
    2.4 细胞冻存  20
    2.5 角质形成细胞免疫细胞化学鉴定  20-21
    2.6 MTT法检测润肤止痒乳对角质形成细胞的无毒浓度范围  21-22
    2.7 MTT法检测润肤止痒乳对角质形成细胞增殖的影响  22-23
    2.8 蛋白质免疫印迹法(western blot)检测磷酸化P38的表达  23-26
    2.9 酶联免疫法(ELISA)测定细胞分泌的VEGF含量  26-27
  3 统计学方法  27-28
第二部分 结果  28-33
  1. 人表皮角质形成细胞鉴定  28
    1.1 形态学鉴定  28
    1.2 免疫细胞化学鉴定  28
  2. 润肤止痒乳对角质形成细胞的无毒浓度范围检测  28-29
    2.1 润肤止痒乳作用下角质形成细胞的形态变化  28
    2.2 润肤止痒乳对角质形成细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)  28-29
  3. 润肤止痒乳对角质形成细胞增殖的影响  29-30
  4. 润肤止痒乳对角质形成细胞P38MAPK信号通道的影响  30-31
  5. SB203580对角质形成细胞增殖及P38MAPK信号通路的影响  31
  6. 润肤止痒乳对角质形成细胞分泌VEGF含量的影响  31-33
第三部分 讨论  33-41
  1. 中医对银屑病的认识  33
  2. 中医外治法治疗银屑病的研究现状  33-35
  3. 润肤止痒乳组方依据和临床研究  35-36
    3.1 组方依据  35
    3.2 现代中药药理学研究  35-36
    3.3 临床研究  36
  4. 润肤止痒乳治疗银屑病的机理探讨  36-41
第四部分 结论  41-42
致谢  42-43
参考文献  43-47
附图  47-48
综述  48-57
  参考文献  55-57
攻读学位期间主要的研究成果  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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