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抗人肝癌单抗轻、重链可变区基因的体外扩增、克隆、表达及初步鉴定

作　者: 杨萍
导　师: 刘彦仿；陈苏民
学　校: 第四军医大学
专　业: 病理学
关键词: 抗人肝癌单抗可变区基因体外扩增分子克隆重组噬菌体呈现技术大肠杆菌免疫组织化学
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 1994年
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内容摘要

肝癌的发病率在我国一直很高，其发生隐匿、转移早、死亡率高。因此对肝癌的诊断和治疗是多年来研究的热点。生物学治疗中抗体导向研究是基于单克隆抗体技术的发展基础上进行的，已取得了显著成果。但使用的单抗多属啮齿类，应用于人体易引起免疫排斥反应，不能反复多次使用。人单克隆抗体产量低、不稳定，使用人外周血细胞很难使其永生化(immortalize)，用鼠骨髓瘤细胞与人B细胞融合，又易使人细胞染色体丢失，导致杂交瘤细胞的不稳定性。用EB病毒感染人B细胞一般会产生不稳定的IgM型，对抗原亲和力低．限制了它们的使用。近十年来发展起来的基因工程抗体技术给人们带来了希望。利用基因重组技术将抗体可变区基因克隆，使其永生化，并在哺乳类细胞，酵母或细菌中表达，得到与亲本抗体有同样结合抗原活性的基因工程抗体。

全文目录

英文缩写词表  6-9
中文摘要  9-12
英文摘要  12-16
前言  16-18
文献回顾  18-54
  一、抗体基因的结构及特征  19-23
  二、基因工程抗体的种类  23-36
    (一) 嵌合抗体(Chimeric Antibody)  23-25
    (二) 重构抗体(Reshaping Antibody)  25-28
    (三) Fab抗体  28-29
    (四) Fv抗体  29
    (五) 单链抗体(Single Chain Antibody)  29-30
    (六) 单域抗体(Single Domain Antibody)  30
    (七) 最小识别单位(Minimal Recognitin Uuits)  30
    (八) 双功能抗体(Bispecific Antibody)  30-32
    (九) 重组噬菌体抗体(Phage Surface Display)  32-36
  三、基因工程抗体的构建及表达  36-48
    (一) 抗体可交区基因的获得  36-40
    (二) 基因工程抗体的表达  40-48
  四、基因工程抗体的应用及前景  48-54
    (一) 基因工程抗体用于治疗  48-50
    (二) 基因工程抗体的发展前景  50-54
第一部分：抗人肝癌单抗HAb27轻、重链可变区基因的体外扩增  54-65
  材料与方法  55-59
    一、实验材料  55-56
    二、实验方法  56-59
  结果  59-62
    一、HAb27杂交瘤分泌McAb活性检测  59
    二、细胞总RNA的提取  59
    三、PCR扩增HAb27轻、重链可变区基因片段  59-62
  讨论  62-65
第二部分：抗人肝癌单抗HAb27轻、重链可变区基因的定向克隆及序列测定  65-96
  材料与方法  66-78
    一、实验材料  66-71
    二、实验方法  71-78
      (一) PCR产物VH、VL的定向克隆  71-73
      (二) HAb27 VH、VL基因的核酸序列测定  73-78
  结果  78-94
    一、PCR扩增VH、VL及pCU19的限制性酶切  78
    二、重组质粒的鉴定  78-79
    三、VH、VL亚克隆到单链M13p18、mp19中  79-80
    四、VH、VL基因序列分析  80-94
  讨论  94-96
第三部分：抗人肝癌单抗HAb27可变区基因在重组噬菌体呈现系统中的表达及初步鉴定  96-120
  材料与方法  97-107
    一、实验材料  97-100
    二、实验方法  100-107
  结果  107-116
    一、大量提取质粒的鉴定  107-108
    二、VH、VL基因重组入pCSM21质粒的鉴定  108-112
    三、表达重组抗体结合抗原活性的初步鉴定  112-116
  讨论  116-120
小结  120-121
致谢  121-122
参考文献  122-137

抗人肝癌单抗轻、重链可变区基因的体外扩增、克隆、表达及初步鉴定

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