学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

粗毛栓菌漆酶的生化和分子生物学研究

作　者: 董佳里
导　师: 张义正
学　校: 四川大学
专　业: 遗传学
关键词: 白腐真菌粗毛栓菌漆酶发酵条件同工酶谱纯化性质基因克隆基因表达 cDNA文库
分类号: TQ925
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 491次
引　用: 3次
阅　读: 论文下载

内容摘要

利用RB亮蓝平板检测方法发现,粗毛栓菌(Trametes gallica)有较强的漆酶产生能力,其显色反应明显强于黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)。对液体培养条件下粗毛栓菌产生漆酶的研究表明,2%以下的胰蛋白胨能明显促进漆酶的产生;高碳(1%葡萄糖)条件下产生的漆酶明显高于低碳条件;高浓度铜离子(200μmmol/L)能有效促进该菌漆酶的产生;胰蛋白胨-葡萄糖培养基(TG)和细菌用蛋白胨-2%葡萄糖培养基(PG)产生的漆酶活性最高。研究了59种芳香类化合物对粗毛栓菌漆酶产生的影响,发现27种对漆酶产生有促进作用,其中对苯二酚作用最强;另外32种化合物在不同程度上抑制漆酶的产生,对硝基苯酚和2,6-二氯苯酚的抑制作用最强;不同取代基化合物、同分异构体化合物对漆酶产生表现出一定规律性,其中对位、邻位和间位的芳香化合物的促进产酶作用按对位>间位>邻位排列。用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳活性染色法研究了12种培养基对粗毛栓菌漆酶同工酶谱的影响。结果表明,不同培养基产生不同的漆酶同工酶谱。其中在振荡培养条件下,马铃薯提取物-酒石酸铵-葡萄糖培养基(PAG)和氨基酸混合物-酒石酸铵-葡萄糖培养基(AAG)均可产生多达14条漆酶同工酶谱带,而在静置培养下的PAGⅠ培养基产生的同工酶带仅为4条。综合各种培养条件,粗毛栓菌产生的漆酶同工酶数目高达20种,是迄今发现产生漆酶种类最多的一种真菌。通过硫酸铵沉淀,DEAE-sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析,Sephadex

全文目录

图片目录  8-11
表格目录  11-13
中文摘要  13-16
英文摘要  16-20
第一章粗毛栓菌漆酶产生条件和同工酶谱研究  20-57
  摘要  21-22
  1 引言  22-23
  2 材料和方法  23-31
    2.1 实验材料  23-27
    2.2 实验方法  27-31
  3 结果  31-47
    3.1 粗毛栓菌的RB亮蓝、鞣酸平板观察  31-33
    3.2 碳源、氮源对粗毛栓菌漆酶产生的影响  33-35
    3.3 铜离子对粗毛栓菌漆酶产生的影响  35-36
    3.4 不同氮源培养基对粗毛栓菌漆酶产生的影响  36-38
    3.5 芳香化合物对粗毛栓菌漆酶产生的影响  38-42
    3.6 培养条件对粗毛栓菌漆酶同工酶谱的影响  42-44
    3.7 芳香化合物对粗毛栓菌漆酶同工酶谱的影响  44-46
    3.8 培养条件对粗毛栓菌胞外蛋白质谱的影响  46-47
  4 讨论  47-53
    4.1 粗毛栓菌产生漆酶能力的初步鉴定  47
    4.2 粗毛栓菌漆酶发酵条件研究  47-50
    4.3 粗毛栓菌漆酶同工酶谱和蛋白质谱研究  50-52
    小结  52-53
  5 参考文献  53-57
第二章粗毛栓菌漆酶同工酶的分离纯化和性质研究  57-109
  摘要  58-59
  1 引言  59-61
  2 材料和方法  61-71
    2.1 实验材料  61-63
    2.2 实验方法  63-71
  3 结果  71-100
    3.1 漆酶的分离纯化  71-75
    3.2 漆酶的生物物理性质研究  75-80
    3.3 漆酶的生物化学性质研究  80-97
    3.4 漆酶N-末端氨基酸序列的测定  97-100
  4 讨论  100-105
    4.1 漆酶的纯化方法  100-101
    4.2 粗毛栓菌漆酶的生物物理性质  101
    4.3 粗毛栓菌漆酶的生物化学性质  101-103
    4.4 粗毛栓菌漆酶的N-末端氨基酸序列的同源性  103-104
    小结  104-105
  5 参考文献  105-109
第三章粗毛栓菌漆酶基因编码序列的克隆和分析  109-148
  摘要  110-111
  1 引言  111-112
  2 材料和方法  112-120
    2.1 实验材料  112-114
    2.2 实验方法  114-120
  3 结果  120-141
    3.1 粗毛栓菌漆酶基因克隆策略  120-121
    3.2 粗毛栓菌漆酶基因克隆及鉴定  121-123
    3.3 漆酶基因和cDNA片段的序列分析  123-130
    3.4 漆酶基因编码区和cDNA片段之间的同源性分析  130-132
    3.5 漆酶成熟肽编码区lacA的同源性分析  132-141
  4 讨论  141-146
    4.1 粗毛栓菌漆酶基因的克隆  141
    4.2 粗毛栓菌漆酶基因多样性  141-142
    4.3 lacA基因核苷酸序列构成  142-143
    4.4 漆酶的氨基酸组成分析  143
    4.5 密码子的偏爱性分析  143-145
    小结  145-146
  5 参考文献  146-148
第四章粗毛栓菌漆酶cDNA在大肠杆菌中的表达和cDNA文库的构建  148-170
  摘要  149-150
  1 引言  150-152
  2 材料和方法  152-159
    2.1 实验材料  152-155
    2.2 实验方法  155-159
  3 结果  159-164
    3.1 lacA基因在大肠杆菌中的融合表达  159-160
    3.2 粗毛栓菌cDNA文库的构建  160-164
  4 讨论  164-168
    4.1 漆酶基因的异源表达  164-165
    4.2 cDNA文库构建  165-166
    4.3 关于粗毛栓菌漆酶研究的几点思考  166-167
    小结  167-168
  5 参考文献  168-170
文献综述漆酶的研究进展  170-212
  1 前言  171
  2 各种生物产生的漆酶  171-176
    2.1 植物中的漆酶  171-172
    2.2 真菌漆酶  172-173
    2.3 原核生物中的漆酶  173-176
    2.4 其它生物中的漆酶  176
  3 真菌漆酶研究进展  176-195
    3.1 影响真菌漆酶发酵的因素  177-178
    3.2 真菌漆酶同工酶多样性  178-179
    3.3 真菌漆酶的物理化学性质  179-187
    3.4 真菌漆酶的生理功能  187-189
    3.5 真菌漆酶的分子生物学  189-193
    3.6 真菌漆酶的应用  193-195
  4 关于漆酶研究的展望  195-196
  参考文献  196-212
致谢  212-213
在读期间发表及待发表论文情况  213-214
申明  214

粗毛栓菌漆酶的生化和分子生物学研究

内容摘要

全文目录

相似论文