脊髓前角与盆神经节之间植块联合培养的实验研究【目的】研究大鼠脊髓前角神经元 的学位论文">运动神经元与盆神经节神经元之间的相互作用。【方法】利用神经组织的植块培养法建立新生大鼠脊髓前角与成年大鼠盆神经节之间植块的联合培养体系" />
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大鼠脊髓运动神经元与盆节神经元之间在体外突触形成的研究

作　者: 程时刚
导　师: 肖传国
学　校: 华中科技大学
专　业: 外科学
关键词: 脊髓前角 盆神经节 植块 联合培养 新生大鼠 脊髓 运动神经元 成年大鼠 神经元 盆节神经元 突触
分类号: R741
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


第一部分：大鼠脊髓前角 的学位论文">脊髓前角与盆神经节之间植块联合培养的实验研究【目的】研究大鼠脊髓前角神经元 的学位论文">运动神经元与盆神经节神经元之间的相互作用。【方法】利用神经组织的植块培养法建立新生大鼠脊髓前角与成年大鼠盆神经节之间植块的联合培养体系，倒置相差显微镜下观察两种神经元之间形态学的变化。【结果】联合培养体系中神经组织的植块在体外培养时均生长良好，脊髓前角植块生长出的部分神经突起与盆节神经元的神经突起交织分布在一起，形成明显形态上的接触。【结论】大鼠脊髓前角运动神经元与盆节神经元之间形成明显形态上的接触，提示在体外联合培养时脊髓运动神经元的轴突与盆节神经元之间可能形成了功能性的相互作用。第二部分：大鼠脊髓运动神经元与盆节神经元之间在体外的联合培养一新生大鼠脊髓运动神经元的分离与培养【目的】研究新生大鼠脊髓运动神经元的体外分离、培养和纯化方法。【方法】从新生1d大鼠的脊髓前角组织中分离脊髓运动神经元，采用密度梯度离心，差速贴壁及无血清限制性培养基等措施获得相对纯化的运动神经元。应用脊髓运动神经元特异的胆碱乙酰转移酶多克隆抗体(ChAT)对培养细胞进行鉴定。【结果】原代培养细胞体外培养72h后，神经元生长出许多神经突起，具有运动神经元的特征形态。神经细胞能存活2w以上。脊髓运动神经元表达胆碱乙酰转移酶，呈ChAT阳性反应。【结论】本实验提供了一种成功进行新生大鼠脊髓运动神经元原代培养的方法，为运动神经元的进一步研究提供了帮助。二成年大鼠盆节神经元的原代培养【目的】研究成年大鼠盆节神经元的体外分离、培养方法，为建立脊髓运动神经元与盆节神经元的联合培养体系奠定基础。【方法】从成年雄性大鼠盆神经节中分离盆节神经元，经过充分摸索采用胶原蛋白酶、胰蛋白酶两步酶消化、分次吹打及无血清限制性培养基辅以神经生长因子等方法进行盆节神经元的原代培养。应用免疫细胞化学技术以神经微丝单克隆抗体(NF-200)对成年盆节神经元进行鉴定。【结果】我们培养的盆节神经元生长良好，神经细胞存活2w以上。盆节神经元呈NF-200阳性反应。【结论】本实验建立了一种成功进行成年大鼠盆节神经元原代培养的方法，能获得较高存活率的盆节神经元。该方法经济、高效、省时。三大鼠脊髓运动神经元与盆节神经元之间在体外突触形成的研究【目的】探讨新生大鼠脊髓运动神经元与成年大鼠盆节神经元之间体外突触的形成情况，为人工体神经-内脏神经反射弧提供更坚实的理论基础。【方法】将绿色荧光蛋白(GFP)标记的成年大鼠盆节神经元与新生大鼠脊髓运动神经建立联合培养体系，观察联合培养体系中神经细胞的生长情况及运动神经元与盆节神经元之间的连接情况。【结果】原代培养的两种神经细胞均能较好的存活、生长成熟。运动神经元与盆节神经元在联合培养3-4 d后在倒置相差显微镜下观察到明显形态上的接触。突触后致密蛋白(PSD-95)抗体染色结合形态学观察提示运动神经元与盆节神经元之间突触的形成。【结论】大鼠脊髓运动神经元与盆节神经元之间在体外能够形成突触样连接，为人工体神经-内脏神经反射弧中膀胱的功能重建提供了理论依据。

全文目录


缩略词表  7-9
前言  9-15
  参考文献  12-15
中文摘要  15-18
ABSTRACT  18-22
第一部分:大鼠脊髓前角 的学位论文">脊髓前角与盆神经节之间植块联合培养的实验研究  22-36
  引言  22-23
  材料与方法  23-27
  结果  27-30
  讨论  30-33
  参考文献  33-36
第二部分:大鼠脊髓神经元 的学位论文">运动神经元与盆节神经元在体外的联合培养  36-82
  一 新生大鼠脊髓运动神经元的原代培养  36-51
    引言  36-37
    材料与方法  37-41
    结果  41-44
    讨论  44-47
    参考文献  47-51
  二 成年大鼠盆节神经元的原代培养  51-67
    引言  51-52
    材料与方法  52-57
    结果  57-60
    讨论  60-63
    参考文献  63-67
  三 大鼠脊髓运动神经元与盆节神经元之间在体外突触形成的研究  67-82
    引言  67-68
    材料与方法  68-72
    结果  72-76
    讨论  76-79
    参考文献  79-82
综述 可视荧光技术在中枢神经系统突触发生中的应用  82-94
  参考文献  89-94
附录 在校期间发表论文情况  94-95
致谢  95

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学
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