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成人腹股沟疝患者腹外斜肌腱膜中基质金属蛋白酶-2及其抑制因子的表达及意义

作　者: 贺志宽
导　师: 陈健民
学　校: 郑州大学
专　业: 普通外科
关键词: 腹股沟疝腹外斜肌腿膜 MMP-2基因 TIMP-2基因 RT-PCR
分类号: R656.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景与目的腹股沟疝是一种常见病、多发病。据统计,腹股沟疝的发病率在3-5‰,而在60岁以上男性人群中的发病率可高达1-5%。但是,迄今为止,人们还不明了腹股沟疝发生的确切原因。多年来人们一直认为,腹股沟疝是解剖因素及动力因素等多方面作用的结果,即腹股沟管后壁的薄弱或缺损及腹腔内压力升高因素是腹股沟疝发生的主要原因。近年来,有学者提出生物化学因素。目前一致认为：细胞外基质(extracellular matrixes, ECM)中I型胶原含量下降,Ⅲ型胶原含量相对增多,Ⅰ/Ⅲ型胶原比例失调,产生结缔组织代谢紊乱,从而导致腹股沟后壁腹横筋膜薄弱或缺损,最终促使腹股沟疝的发生,说明胶原代谢与腹股沟疝的发生密切相关。胶原是ECM的主要成分。其代谢受基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase, MMPs)及其抑制剂(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase,TIMPs)的调节。MMPs为Zn2+依赖性肽链内切酶,有广泛的ECM降解作用。而TIMPs为MMPs天然的特异性抑制因子,能1：1结合活化的MMP,阻止其与底物结合,从而间接参与胶原代谢。其中MMP-2主要促使Ⅰ型胶原降解,干扰其合成,而TIMP-2是MMP-2的特异性抑制剂,主要通过阻止MMP-2酶原的活化以及阻止活化MMP-2与底物结合并发挥作用,二者相互作用,调节ECM中的胶原代谢。目前对MMPs和TIMPs在结缔组织中的表达与腹股沟疝发生发展的关系研究,在国际、国内报道甚少。本实验应用逆转录-聚合酶链锁反应(Reverse transcript polymerase chain reaction, RT-PCR)技术,分析研究MMP-2(mRNA)及TIMP-2 (mRNA)在成人原发性腹股沟疝患者腹外斜肌腱膜中的表达与腹股沟疝的关系,从生物化学方面来深入探讨和完善腹股沟疝的发病原因,为腹股沟疝的预防和临床治疗提供依据。材料与方法1.材料：取腹股沟疝患者腹股沟管前壁腹外斜肌腱膜25例(斜疝15例、直疝10例)作为实验组；再取同期收治的无疝患者腹外斜肌腱膜10例作为对照组,-80度低温冰箱冻存备用。2.试剂来源：TRNzol Reagent试剂、TIANScript cDNA第一链合成试剂盒、2×Taq PCR MasterMix试剂盒均购自北京天根生化科技有限公司；特异性引物购自上海生物工程公司。3. RT-PCR:采用RT-PCR两步法处理标本,实验步骤按试剂盒说明书进行。4.统计学处理：所有结果以均数±标准差(χ±s)表示。统计分析采用SPSS16.0统计软件进行。多组均数间的比较采用单因素方差分析；两样本均数间的比较采用t检验：数据相关性分析采用Pearson方法。P值<0.05有统计学意义。结果1. MMP-2 (mRNA)和TIMP-2 (mRNA)在斜疝组、直疝组及对照组中的表达。MMP-2的表达斜疝组为0.87±0.20,直疝组1.11±0.17,对照组0.83±0.23。直疝组呈高表达,与对照组相比(p=0.008<0.05)有统计学意义。斜疝组与对照组相比(p=0.0616>0.05)无统计学意义。TIMP-2的表达斜疝组0.92±0.19,直疝组0.61±0.16,对照组1.06±0.21。直疝组呈低表达,与对照组相比(p=0.000<0.05)有统计学意义。斜疝组与对照组相比(p=0.07>0.05)无统计学意义。2. MMP-2 (mRNA)和TIMP-2 (mRNA)表达与年龄的关系。MMP-2的表达随着年龄增大而增高,与年龄呈正相关(r=0.365,p=0.026)；TIMP-2的表达随着年龄增大而降低,与年龄呈负相关(r=-0.359,p=0.034)。3. MMP-2 (mRNA)和TIMP-2 (mRNA)表达与吸烟的关系。MMP-2的表达,非吸烟组(16例)为0.829±0.198,吸烟组(19例)为1.008+0.213。吸烟组与非吸烟组相比为高表达(t=6.782 p=0.013<0.05),差异有统计学意义。TIMP-2的表达,非吸烟组为0.983+0.246,吸烟组为0.800+0.207,吸烟组与非吸烟组相比为低表达(t=5.557 p=0.024<0.05),差异有统计学意义。结论1.腹股沟疝患者腹外斜肌腱膜ECM中MMP-2呈高表达,TIMP-2呈低表达,表明二者参与了胶原降解代谢过程,在腹股沟直疝发生发展过程中起着重要作用。与腹股沟斜疝的发生发展无关。2.随着年龄增大MMP-2表达增高,TIMP-2表达降低,机体胶原降解代谢增强,而腹股沟疝的发生率增高。3.吸烟可促使机体结缔组织中MMP-2高表达及TIMP-2低表达,可促使腹股沟疝的发生发展。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-12
中英文缩略词表  12-13
前言  13-15
材料与方法  15-22
结果  22-27
讨论  27-32
结论  32-33
参考文献  33-37
综述成人腹股沟疝的病因学研究进展  37-54
  参考文献  50-54
个人简历  54-55
在学期间发表的学术论文与研究成果  55-56
致谢  56

成人腹股沟疝患者腹外斜肌腱膜中基质金属蛋白酶-2及其抑制因子的表达及意义

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