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神经病理性疼痛中星形胶质细胞的激活及与痛觉变化的关系

作　者: 王江栓
导　师: 臧卫东
学　校: 郑州大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 神经病理性疼痛星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白波形蛋白丝裂原活化蛋白激酶
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景与目的：神经病理性疼痛由于涉及到复杂的调控机理至今没有行之有效的治疗方法。传统的研究认为痛觉的传导仅限于神经元之间信号传递,而胶质细胞被认为不参与痛觉的信号传导,仅对神经元保护、支持、修复。然而近年来胶质细胞特别是星形胶质细胞在神经病理性疼痛中的作用逐步受到学者们的重视。本实验通过观察大鼠坐骨神经慢性结扎模型的脊髓中星形胶质细胞的激活情况及其与痛觉增强之间的关系,为星形胶质细胞在神经病理性疼痛中的作用提供基础研究资料。波形蛋白(Vimentin)主要表达于增殖期的星形胶质细胞。研究表明Vimentin在脊髓横断条件下,可在成年大鼠脊髓的星形胶质细胞中表达,在神经性病理性疼痛的大鼠模型中其表达如何?本实验通过观察大鼠CCI模型中脊髓第4-5腰椎段胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Vimentin的表达分析其与神经病理性疼痛的关系。文献报道在神经病理性疼痛中,脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)传导通路均被激活。星形胶质细胞的激活与哪种细信号传导通路有关?本实验通过观察CCI模型中脊髓第4-5腰椎段磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达与神经系统的神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞之间的关系,探索神经病理性疼痛中星形胶质细胞被激活后的相关信号传导通路。方法：1.建立坐骨神经慢性压迫模型并观察其热痛阈和机械痛阈的变化120只SD雄性成年大鼠被随机分为2组：CCI模型组、假手术组(Sham组)。CCI模型组进行右侧坐骨神经结扎术；假手术组仅暴露右侧坐骨神经不予结扎。两组大鼠于术前1d和术后1、3、7、14、28d分别测量(每个时间点每组10只)后爪左右肢的热痛阈(PWTL)和机械痛阈(MWT),并进行自身对照和组间对照。2. RT-PCR检测GFAP和Vimentin mRNA在大鼠CCI模型中的相对表达量两组大鼠于每个时间点每组取5只大鼠的脊髓第4-5腰椎段,RT-PCR检测GFAP和Vimentin mRNA的相对表达量。3.荧光免疫组化检测GFAP和Vimentin在大鼠CCI模型中的表达两组大鼠于每个时间点每组取5只大鼠的脊髓第4-5腰椎段做石蜡切片,荧光免疫组化标记GFAP和Vimentin的表达,后选择CCI组免疫荧光强度表达最强的时间点(术后7d)的脊髓切片进行GFAP和Vimentin免疫荧光双标。并对CCI组术侧PWTL值、MWT值与GFAP、Vimentin的平均荧光强度进行关联性分析。4.荧光免疫组化检测p-P38MAPK、p-JNK在在大鼠CCI模型中的表达20只SD雄性成年大鼠被随机分为2组：CCI模型组、假手术组。并与术前1d和术后7d取脊髓第4-5腰椎段做石蜡切片,荧光免疫组化标记p-p38 MAPK和p-JNK的表达,并分别与NeuN、GFAP、OX-42进行免疫荧光双标。结果：1.CCI模型热痛阈和机械痛阈的变化CCI组术后出现结扎侧脚趾并拢、屈曲、外翻等行为学变化。术后3-14d CCI组大鼠术侧足MWT值、PWTL值明显降低,与自身对照侧及Sham组相比差异有统计学意义(P<0.5)。2.GFAP和Vimentin mRNA在大鼠CCI模型脊髓中的相对表达量CCI组术侧GFAP和Vimentin mRNA相对表达量于术后3-14d显著增强且与自身对照侧及Sham组相比差异有统计学意义(P<0.5)。3.GFAP和Vimentin在大鼠CCI模型脊髓中的表达情况CCI组脊髓背角术侧GFAP和Vimentin的表达于术后3-14d明显增强,阳性细胞数显著增多,细胞体积变大,突起变长；且平均荧光强度明显增高,与自身对照侧及Sham组比较差异有统计学意义(P<0.5)；术后7d的免疫荧光双标显示两者存在较好的分布一致区。关联性分析显示MWT、PWTL值与GFAP、Vimentin的平均荧光强度呈负相关(P<0.05)。4. p-p38MAPK和p-JNK在大鼠CCI模型脊髓中的表达情况CCI组p-p38MAPK、p-JNK免疫组化染色显示数量较自身对照侧和Sham组明显增多,差异有统计学意义(P<0.5)；免疫荧光双标显示p-P38MAPK /OX-42, p-JNK/GFAP的表达存在较好的分布一致区。结论：1.在神经病理性疼痛中,大鼠脊髓背角星形胶质细胞被激活,出现了细胞的增殖变化；CCI模型大鼠的痛觉增强与脊髓背角星形胶质细胞的激活呈正相关。2.在神经病理性疼痛中,p38MAPK和JNK两种信号传导通路被激活,其中JNK信号传导通路参与了星形胶质细胞的痛觉信号传导。

全文目录

中文摘要  4-7
Abstract  7-12
缩略词  12-13
引言  13-16
材料与方法  16-26
结果  26-32
附图  32-45
讨论  45-49
结论  49-50
参考文献  50-53
综述  53-66
  参考文献  61-66
个人简历  66-67
致谢  67

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