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嗅鞘细胞对活化以及损伤的星形胶质细胞的作用

作　者: 刘志元
导　师: 刘锦波
学　校: 南京医科大学
专　业: 骨外科
关键词: 嗅鞘细胞 星形胶质细胞 增殖 凋亡 胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)
分类号: R651.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


研究目的:研究体外培养的大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cell ,OEC)对活化以及损伤的星形胶质细胞(astrocytes ,AST)的作用。研究方法:(1)体外培养和鉴定嗅鞘细胞和星形胶质细胞。(2)星形胶质细胞经纯化传代,细胞融合后利用物理划伤法得到活化的星形胶质细胞;用双氧水过氧化法得到损伤的星形胶质细胞。(3)将嗅鞘细胞与活化的星形胶质细胞共培养24 h,通过MTT方法观察星形胶质细胞增殖能力的改变;通过免疫细胞荧光法检测细胞形态、数量,半定量分析胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)的表达;通过RT-PCR方法检测GFAP mRNA表达水平差异;通过Western blotting方法检测GFAP蛋白表达水平差异。(4)将嗅鞘细胞上清液(OEC culture medium,OECCM)与损伤的星形胶质细胞共培养72 h,倒置显微镜观察细胞形态、数量变化;通过MTT方法观察星形胶质细胞增殖能力的变化;通过流式细胞术(AnnexinⅤ/PI双染色法)检测细胞凋亡;通过透射电镜观察细胞超微结构的变化。研究结果:(1)星形胶质细胞活化以后,细胞增殖能力增强,在基因水平表达更多的GFAP,在蛋白水平表达更多的GFAP和CSPG。(2)星形胶质细胞损伤模型与正常组相比,细胞数量明显减少,存活的细胞胞体皱缩、胞膜不清楚,细胞突起明显回缩或断裂;增殖能力下降;细胞坏死和凋亡率增高;超微结构示细胞膜部分破裂,线粒体肿胀,内质网肿胀,细胞质内大量空泡形成。(3)活化的星形胶质细胞与嗅鞘细胞直接或者间接共培养后,其增殖能力提高;共培养后活化的星形胶质细胞表达的GFAP和CSPG降低。(4)嗅鞘细胞上清液作用于星形胶质细胞过氧化损伤模型后,细胞数量增加,存活的细胞形态趋于正常;细胞的坏死和凋亡率下降;超微结构示细胞膜完整性较好,内质网形态基本正常,线粒体肿胀减轻,细胞质内空泡明显减少。存活细胞增殖能力下降。结论:嗅鞘细胞作用于活化后的星形胶质细胞以后,能够促进细胞的分裂增殖,同时能够减少星形胶质细胞胶质化,降低抑制性细胞因子的表达;嗅鞘细胞培养液作用于损伤的星形胶质细胞后,减少细胞的坏死和凋亡,对损伤的星形胶质细胞有一定的保护作用;同时减少存活细胞的分裂增殖。

全文目录


中文摘要  8-10
英文摘要  10-12
第一章 前言  12-21
  1.1 本实验的研究背景  12-17
    1.1.1 脊髓损伤修复的现状  12-13
    1.1.2 活化的星形胶质细胞在脊髓损伤修复中发挥“双刃”效应  13-15
    1.1.3 嗅鞘细胞在脊髓损伤修复中的作用  15-16
    1.1.4 嗅鞘细胞与星形胶质细胞之间相互作用  16-17
  1.2 本论文研究的内容、目标、方法、实验方案的设计  17-21
    1.2.1 研究内容  17
    1.2.2 研究目标  17-18
    1.2.3 研究方法及技术  18
    1.2.4 实验方案的设计  18-21
第二章 嗅鞘细胞以及星形胶质细胞的分离培养和鉴定  21-25
  2.1 材料和方法  21-23
    2.1.1 材料  21
    2.1.2 实验方法  21-23
  2.2 实验结果  23-25
    2.2.1 嗅鞘细胞和星形胶质细胞形态  23
    2.2.2 嗅鞘细胞和星形胶质细胞鉴定结果  23-25
第三章 嗅鞘细胞对于活化的星形胶质细胞的作用  25-34
  3.1 材料和方法  25-29
    3.1.1 材料  25
    3.1.2 方法  25-29
  3.2 结果  29-32
    3.2.1 共培养前后活化的星形胶质细胞的增殖能力变化  29
    3.2.2 各组星形胶质细胞细胞形态以及GFAP、CSPG 蛋白的表达  29-31
    3.2.3 与嗅鞘细胞共培养后星形胶质细胞 GFAP mRNA 的表达  31-32
    3.2.4 共培养后活化的星形胶质细胞 GFAP 蛋白的表达  32
  3.3 讨论  32-34
第四章 嗅鞘细胞上清液液对损伤的星形胶质细胞的作用  34-42
  4.1 材料和方法  34-35
    4.1.1 材料  34
    4.1.2 方法  34-35
  4.2 实验结果  35-40
    4.2.1 细胞形态以及数量的变化  35-37
    4.2.2 细胞增殖能力的改变  37
    4.2.3 流式细胞术检测各组细胞凋亡及死亡率  37-38
    4.2.4 细胞超微结构的变化  38-40
  4.3 讨论  40-42
参考文献  42-47
综述  47-56
攻读硕士学位期间发表的文章  56-57
致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 外科学各论 > 头部及神经外科学 > 脊髓
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