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NRAGE基因甲基化调控其在乳腺癌细胞中的表达

作　者: 黄银华
导　师: 温传俊
学　校: 南京师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: NRAGE 表达调控 DNA甲基化
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景与目的：NRAGE (neurotrophin receptor p75-interacting MAGE homolog)基因是黑色素瘤相关抗原MAGE家族成员之一。大部分MAGE家族蛋白在肿瘤和睾丸中表达,而NRAGE在发育早期以及成年个体各个组织中都有表达。研究显示,NRAGE基因具有明显的促进细胞凋亡和抑制肿瘤转移的能力,是一个潜在的抑癌基因。抑癌基因启动子区CpG岛高甲基化导致其表达沉寂,是癌症发生中的一个重要机制。本课题研究乳腺癌细胞系NRAGE基因的表达调控及其启动子区DNA甲基化的关系。方法：采用Real-time PCR检测NRAGE在高转移乳腺癌细胞系MDA-MB-231和低转移乳腺癌细胞系MCF-7中的mRNA表达；Methyl Primer Express(?)Software (Applied Biosystems)软件分析NRAGE启动子区是否存在CpG岛；使用脱甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞,半定量RT-PCR法及Western blot法检测加药后NRAGE基因mRNA及蛋白表达的变化；甲基化特异性PCR法(methylation-specific polymerase chain reaction, MSP)检测MDA-MB-231和MCF-7细胞中NRAGE基因的甲基化状态。结果：MCF-7细胞中NRAGE基因mRNA表达水平比MDA-MB-231细胞高40% ;NRAGE基因启动子区存在CpG岛；经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MDA-MB-231细胞中NRAGE基因mRNA及蛋白表达明显上升,而MCF-7细胞中NRAGE基因mRNA及蛋白表达无明显变化；MSP检测显示MDA-MB-231细胞中NRAGE启动子区CpG岛高甲基化,而MCF-7细胞中NRAGE启动子区CpG岛低甲基化。结论：NRAGE基因甲基化可以对其在乳腺癌细胞中的表达进行调控。本研究还显示,NRAGE基因的甲基化状态与乳腺癌细胞的转移能力相关,提示了在临床上NRAGE可以作为一个分子标志物预测乳腺癌的恶性程度。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-6
第一章 综述  6-16
  第一节 DNA甲基化的研究进展  6-11
    1 DNA甲基化及CpG岛  6-7
    2 DNA甲基化的正常生理功能  7-9
    3 DNA甲基化与肿瘤  9-10
    4 DNA甲基化的研究方法-基于亚硫酸盐转化的检测方法  10-11
  第二节 神经营养因子受体相关黑色素瘤抗原基因同源物(NRAGE)的研究进展  11-16
    1 NRAGE基因的结构与表达  11-12
    2 NRAGE基因与细胞凋亡  12-14
    3 NRAGE与细胞周期抑制  14-15
    4 NRAGE基因与肿瘤  15-16
第二章 NRAGE甲基化调控其在乳腺癌细胞中的表达研究  16-37
  第一节 乳腺癌细胞系中NRAGE的差异表达  16-22
  第二节 NRAGE基因启动子区CpG岛分析  22-25
  第三节 5-Aza-CdR加药处理观察NRAGE的表达情况  25-33
  第四节 MSP检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中NRAGE的甲基化状态  33-37
第三章 讨论  37-40
参考文献  40-44
附录  44-45
致谢  45

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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