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循环DNA p16基因启动子区甲基化检测在非小细胞肺癌早期诊断中的意义

作　者: 李仲琪
导　师: 赵铭山；王金德
学　校: 滨州医学院
专　业: 呼吸内科
关键词: 非小细胞肺癌吸烟循环DNA p16基因 DNA甲基化
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 27次
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内容摘要

目的评价检测循环DNA p16基因启动子区异常甲基化对非小细胞肺癌(NSCLC)及高危人群早期诊断的价值。方法选取21例NSCLC确诊癌患者,20例重度吸烟健康者以及15例无吸烟史的健康者,分别留取外周静脉血,离心血浆,提取其中循环游离DNA。亚硫酸盐修饰后,应用甲基化特异性PCR(MSP)方法,检测NSCLC患者及NSCLC高危人群循环DNA p16基因启动子区甲基化频率,评价其诊断价值。其中SSI甲基转移酶修饰后的健康人全血DNA作为MSP甲基化的阳性对照,胎盘血DNA作为甲基化阴性对照和非甲基化阳性对照,纯水作为非甲基化阴性对照。结果1.全血DNA和胎盘血DNA提取液的浓度及纯度均符合后续亚硫酸盐修饰及甲基化修饰的要求。2.经过分析、论证,循环DNA提取液中DNA含量也满足后续亚硫酸盐修饰过程的要求。3.NSCLC、吸烟组及非吸烟组比较(图1,表1):在21例NSCLC中,检测到血浆游离循环DNA p16基因启动子区甲基化阳性6例,阳性率为28.6%;20例重度吸烟者p16甲基化阳性2例,阳性率为10%;健康非吸烟者15例,无一例检测到p16基因甲基化。NSCLC组与健康不吸烟组比较,差异有统计学意义(P=0.030),NSCLC循环DNA p16基因甲基化阳性率高于后者。NSCLC组p16甲基化阳性率高于重度吸烟组,重度吸烟组甲基化阳性率高于健康不吸烟组,但差异均无统计学意义(P=0.238,P=0.496)。4.NSCLC组各肿瘤分型及分期的比较(表2):NSCLC组中,8例鳞癌中检测到p16甲基化阳性3例(阳性率37.5%),13例腺癌中检测到3例(阳性率23.1%),组间差异无统计学意义。其中I-II期肺癌6例(阳性率16.7%,1/6),III-IV期肺癌15例(阳性率33.3%,5/15),两者间差异也不具有统计学意义。结论1.肺癌患者循环DNA p16基因启动子区异常甲基化发生频率明显升高。2.未检测到肺癌患者循环DNA p16基因启动子区异常甲基化发生频率与肺癌分型、分期的相关性。3.吸烟对肺的损伤,可能导致异常p16甲基化频率增加。4.检测循环DNA p16基因启动子区异常甲基化,可能有助于对NSCLC高危人群的筛查及对NSCLC的早期诊断。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
实验材料、试剂和仪器  11-13
实验方法  13-18
结果  18-20
附表  20-23
附图  23-25
讨论  25-29
结论  29-30
致谢  30-31
参考文献  31-34
综述  34-45
  参考文献  38-45
英文缩略语表  45-46
已发表的论著  46-53
已发表的综述  53-57

循环DNA p16基因启动子区甲基化检测在非小细胞肺癌早期诊断中的意义

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