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细颗粒物对H9c2心肌细胞生长及β1受体基因甲基化并表达的影响

作　者: 芦茜
导　师: 袁洪
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: 细颗粒物 β1受体 H9c2心肌细胞心血管系统 DNA甲基化
分类号: R54
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：1.研究细颗粒物(PM2.5)对心肌细胞活力的影响。2.研究PM25对心肌细胞β1受体表达的影响,并探讨其可能机制。方法：本次研究收集本市大气非工业区PM2.5,采样日期为2010年12月-2011年3月。以H9c2大鼠心肌细胞作为研究对象。用不同浓度的PM2.5水溶性及非水溶性成分干预24h。设定1μg/ml为低浓度、10μg/ml为中浓度、100μg/ml为高浓度。在倒置显微镜下观察细胞形态,用MTT法测定细胞存活率。用甲基化特异性PCR (MSP)测定β1受体基因启动子区域甲基化修饰水平。用RT-PCR、荧光定量PCR法分析该基因mRNA表达的差异。用Western Blot法测定蛋白表达差异。结果：1.PM2.5对心肌细胞活力的影响：PM2.5干预H9c2心肌细胞后,细胞存活率在对照组为100.0(%),水溶性成分组低、中、高浓度时分别为95.0±2.5(%)、89.0±2.3(%)、84.0±2.8(%)；非水溶性成分组低、中、高浓度时分别为95.8±2.5(%)、82.6±2.2(%)、57.7±2.0(%)。显示：在1-100μg/ml范围内,细胞活性随着PM2.5浓度的增加受到了明显的抑制,和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。相同浓度下,非水溶成分对细胞活力的影响较水溶性成分明显(P<0.05)。2.PM2.5对心肌细胞β1受体基因启动子区域甲基化修饰水平的影响：PM2.5干预H9c2心肌细胞后,β1受体基因启动子区域甲基化修饰状态在对照组为69.71±1.63(%),水溶性成分组时低、中、高浓度时分别为68.00±1.49(%)、61.00±1.21(%)、55.94±1.53(%)；非水溶性成分组低、中、高浓度时分别为62.09±1.45(%)、49.06±0.96(%)、36.78±2.22(%)。显示：在1-100μg/ml范围内,随PM2.5浓度增高,β1受体基因启动子区域甲基化率逐渐减低,差异有统计学意义(P<0.05)。相同浓度下,非水溶成分对DNA甲基化的影响较水溶性成分明显(P<0.05)。3.PM2.5对心肌细胞β1受体mRNA和蛋白表达的影响：PM2.5干预H9c2心肌细胞后,mRNA相对表达量(2-ΔΔCt)在对照组为1。水溶性成分组低、中、高浓度时分别为1.08±0.06、1.27±0.05、1.71±0.10；非水溶性成分组低、中、高浓度时分别为1.30±0.05、2.28±0.14、5.70±0.23。显示：在1-100μg/ml范围内,随PM2.5浓度增高,β1受体mRNA表达增高,和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。相同浓度下,非水溶成分β1受体mRNA表达较水溶性成分明显(P<0.05)。但在水溶性及非水溶性成分组,随PM2.5浓度增高,蛋白表达未见明显差异(P>0.05)；相同浓度时,两种成分干预后,蛋白表达亦无明显差异(P>0.05)。结论：1.PM2.5可导致H9c2心肌细胞活力减低,并呈剂量依赖性,以非水浴成分更为明显。2.PM2.5可促使心肌细胞β1受体mRNA表达增多,并呈剂量依赖性,以非水溶成分更为明显。与β1受体基因启动子区域的甲基化水平减低一致,提示PM2.5可能通过诱导DNA低甲基化来调控基因表达。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
英文缩略词表  9-12
前言  12-14
第一章: PM_(2.5)对H9C2细胞形态及活性的影响  14-24
  1.1 材料与方法  14-18
  1.2 结果  18-24
第二章: PM_(2.5)对β1受体基因甲基化修饰状态的影响  24-33
  2.1 材料与方法  24-30
  2.2 结果  30-33
第三章: PM_(2.5)对β1受体表达的影响  33-47
  3.1 材料与方法  33-41
  3.2 结果  41-47
第四章讨论  47-49
第五章结论  49-50
参考文献  50-56
综述  56-61
  参考文献  59-61
致谢  61-62
在读期间发表论文和参加科研工作情况  62

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