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纵隔淋巴结转移站数对N2期非小细胞肺癌患者预后的影响及其分子机制

作　者: 张连民
导　师: 王长利
学　校: 天津医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 非小细胞肺癌纵隔淋巴结转移亚组分子分期 MUC4 IGF2
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：许多研究表明单站淋巴结转移的N2期非小细胞肺癌患者预后明显优于多站转移的患者,但其分子机制我们尚不清楚,我们通过检测N2期非小细胞肺癌单站与多站淋巴结转移的相关基因的表达谱,探讨单站纵隔淋巴结转移进一步进展的分子机制,并对差异基因进行初步验证,进一步探讨多站N2肺癌患者预后较差的分子机制,并利用差异表达基因对N2期非小细胞肺癌进行分子分期,进一步指导N2期肺癌的个体化治疗。方法：应用Agilent公司的人类基因组基因芯片分别检测临床信息一致的ⅢA期单站与多站肿瘤组织的基因表达情况,利用生物信息学软件进行比较分析,对差异表达的基因依照功能及所在信号通路进行分类,对其中与肿瘤及淋巴侵袭与转移的相关基因进行分析,并利用RT-PCR方法观察差异基因在单站与多站N2肺癌组织中的表达情况,利用免疫组化及western blot方法对差异基因从蛋白水平进行验证,另收集天津医科大学附属肿瘤医院自2002年至2006年间,随访资料完整的96例N2期肺癌患者的病例及石蜡标本,采用EnVision免疫组织化学二步法检测MUC4、IGF2在N2期肺癌组织中的表达情况；并分析MUC4的表达与临床病理参数、淋巴结转移情况、患者预后及与IGF2蛋白表达的相关性,采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析。结果：1、与单站肺癌相比,多站肿瘤组织中有329个基因的差异表达水平达10倍以上。在这些基因中,与肿瘤转移相关的基因表达有88个,表达上调的基因有51个,表达下调的有37个。2、利用RT-PCR验证部分差异基因,多站肺癌组织中MUC4, ADAM28 mRNA表达水平较单站肺癌明显下调,而KRTDAP, IGF2, CLDN1则显著上调。3、采用Western blot方法检测MUC4蛋白在单站癌组织和多站癌组织中的相对表达量分别为1.037±0.054,0.317±0.047,差异有统计学差异(P<0.05)。4、采用免疫组化检测MUC4在单站N2期肺癌中表达阳性率为73%,明显高于多站肺癌(χ2=16.466,P=0.000),而IGF2在单站N2肺癌中的阳性表达率为46%,低于多站N2肺癌(χ2=2.089,P=0.048)。5、MUC4的表达及同临床病理参数,纵隔淋巴结转移情况及临床预后的关系(1)MUC4着色部位主要位于细胞膜和(或)胞浆,胞核内无表达。MUC4在正常肺组织中的阳性率为25.4%,在N2期肺癌组织中的阳性率为47.9%,差异具有显著的统计学差异(P<0.05)。(2)在不同的临床病理参数之间,MUC4在不同性别、年龄、吸烟状况,肿瘤位置,大体部位,术后病理,肿瘤大小及T分期的N2期肺癌组织中,表达差异无统计学意义；(3)在纵隔淋巴结转移方面,MUC4在不同的淋巴结转移站数,淋巴结转移个数,隆突下淋巴结转移,区域淋巴结转移及临床(病理)N2的癌组织中,出现表达差异(P<0.05)；(4)在全组N2肺癌患者中,MUC4高表达患者共46例,其中位生存期达到43个月,5年生存率为32.6%,明显优于低表达患者(P=0.000),在DFS(无疾病生存期)方面,MUC4高表达组的中位DFS为35个月,5年无疾病生存率达到25.3%,远远优于低表达组(P=0.000)。而IGF2高表达组共53例,其中位生存期为19个月,5年生存率仅为15.1%,明显低于低表达组(P=0.000),在DFS方面,也得到同样的结论。(5)在COX多因素分析中,MUC4及IGF2的表达情况均是影响N2期非小细胞肺癌患者预后的独立因素(P=0.000)。(6) Spearman等级相关分析表明：在N2肺癌组织中,MUC4与IGF2的表达呈负相关(r=-0.226,P=0.027)。6、联合MUC4及IGF2对N2期非小细胞肺癌进行分子分期,其中MUC4++IGF2-组的预后最好,其中位生存期达到61个月,中位DFS为55个月,5年生存率为49.7%,5年无疾病生存率达到44.3%,均优于其他三组(P=0.000)。结论：1、单站N2进展至多站N2是多基因参与,涉及多条信号通路的,多步骤的过程,MUC4,IGF2,ADAM28,CLDN1,S100家族及MMP家族可能在单站N2进展过程中起到关键作用,为进一步理解N2期肺癌患者纵隔淋巴结转移进展的原因及分子机制,并考虑进行针对这些基因进行分子治疗。2、联合MUC4及IGF2可将N2期非小细胞肺癌分为不同的亚组,其中MUC4++IGF2-组的预后最好,可行积极的手术治疗,而对于预后较差的亚组,则不主张行手术切除,而行以化放疗为主的综合治疗模式。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-11
缩略语/符号说明  11-12
前言  12-16
  研究现状、成果  12-15
  研究目的、方法  15-16
一、非小细胞肺癌单站向多站纵隔淋巴结转移进展的基因差异表达研究及初步验证  16-46
  1.1 材料和方法  16-25
    1.1.1 实验材料  16-20
    1.1.2 实验方法  20-25
  1.2 结果  25-41
    1.2.1 表达谱芯片总RNA的质量  25
    1.2.2 基因芯片结果判定  25-26
    1.2.3 ⅢA期N_2单站与多站淋巴结转移肿瘤组织的差异表达基因以及与转移相关基因表达谱的分析  26-33
    1.2.4 RT-PCR  33-35
    1.2.5 Western blot  35-38
    1.2.6 免疫组化  38-41
  1.3 讨论  41-45
  1.4 小结  45-46
二、MUC4及IGF2对N2期非小细胞肺癌预后的影响  46-74
  2.1 材料和方法  46-47
  2.2 结果  47-68
  2.3 讨论  68-73
  2.4 小结  73-74
结论  74-75
参考文献  75-81
发表论文和参加科研情况说明  81-82
综述 N2期非小细胞肺癌个体化治疗研究进展  82-97
  综述参考文献  92-97
致谢  97-98

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