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腋臭患者大汗腺中ApoD和AR的表达变化及AP-1在其中的作用

作　者: 栗颖利
导　师: 陈辉
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: 腋臭大汗腺载脂蛋白D 雄激素受体转录调控 c-Jun氨基末端激酶 AP-1 姜黄素
分类号: R758.741
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

腋臭的发病机制目前尚不明确。有研究表明,臭味的主要成分是(E)-3-甲基-2-己烯酸(E-3-methyl-2-hexenoic acid, E-3M2H),挥发性硫化合物也占有一定比例[1]。人大汗腺中的载脂蛋白D(Apolipoprotein D, ApoD)是一种特异性大汗腺分泌物结合蛋白(Apocrine secretion odor-binding protein, ASOB)。它有两种形式:ASOB1和ASOB2[2]。ASOB2在气味的运输过程中起主要作用。在体内激素或者外部环境的影响下,大汗腺细胞中E-3M2H和ApoD/ASOB2的分泌量增加,E-3M2H与ApoD结合后分泌到大汗腺管腔,通过汗腺导管运输到皮肤表面。在细菌的作用下分泌物分解产生刺鼻的辛辣气味,这种气味严重影响了腋臭患者的日常社交和心理健康。研究发现,JNK信号转导通路与多种疾病(包括肥胖、2型糖尿病、炎症、神经变性以及肿瘤等)的发生机制有关[3]。但是,目前国内外没有JNK与腋臭发病机制的相关性研究。本课题组的前期研究表明:AR信号可以通过JNK1刺激ApoD的表达;但抑制JNK1并不能完全阻断AR信号对ApoD的表达上调;提示AR还可能通过JNK1非依赖的方式刺激ApoD的表达。此外,JNK1本身可以刺激AR的转录活性,提示JNK1可能通过调控AR信号调节ApoD的表达。因此,可以设想AR信号和JNK1信号之间存在某种反馈。本研究通过收集腋臭组和正常组(两组均为志愿者)腋下皮肤组织标本,用免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)、蛋白质印迹法(Western blotting, WB)、荧光定量PCR(Real-time polymerase chain reaction, Real-time PCR)等方法检测载脂蛋白D(Apolipoprotein D, ApoD)和雄激素受体(androgen receptor, AR)在大汗腺中的含量,探讨ApoD和AR与腋臭气味强度的关系。用5α-二氢睾酮联合AP-1抑制剂姜黄素(Curcumin)处理培养的汗腺细胞,进一步研究腋臭发病过程中JNK1下游转录因子AP-1在腋臭发病过程中的作用。从而更好地为腋臭的预防、诊断和治疗提供理论依据和临床指导。目的:1)对腋臭组和正常组(两组均为志愿者)腋部大汗腺组织中ApoD和AR进行检测,探讨它们在腋臭发病中的表达变化及作用。2)探讨腋臭患者大汗腺组织中ApoD和AR的含量与气味强度之间的关系,明确它们在腋臭发病中的作用。3)在明确ApoD和AR与腋臭气味强度之间的关系以及课题组前期研究的基础上,进一步探讨JNK1下游转录因子AP-1对ApoD的上调作用。更深入的研究腋臭发病通路,为腋臭的临床治疗开辟新的途径。方法:1)收集腋臭组和正常组(两组均为志愿者)腋下皮肤组织标本,用HE、免疫组织化学、Western blotting和Real-time PCR等方法检测ApoD和AR在大汗腺中的表达,使用Image-Pro Plus 5.0和FluorChem FC2分析系统对结果进行分析。2)吩咐腋臭志愿者在腋臭气味强度检测前一天沐浴并禁食辛辣刺激食物,检测当天在舒适的环境下进行(室内清洁,室温28°C,关闭门窗)。志愿者充分暴露腋区,由3名医生分别距志愿者1m、3m和5m闻腋臭气味。按照能在≤1m、≤3m、≤5m距离闻及气味把志愿者分为轻、中、重3级。在所有腋臭志愿者行手术治疗的同时取腋下皮肤组织标本。标本经处理后做Real-time PCR检测ApoD和AR的含量,然后做统计学分析与处理。3)取腋臭志愿者腋区皮肤组织,进行汗腺细胞培养。用Curcumin抑制AP-1的活性,通过Real-time PCR实验方法检测ApoD在Curcumin抑制下的表达变化。结果:1)腋臭组大汗腺组织中ApoD和AR的表达明显高于正常对照组,两组之间表达的差异有统计学意义(P﹤0.05)。2) ApoD和AR相对表达量的等级与气味强度之间有相关关系(P﹤0.05)。ApoD和AR相对表达量的等级随着气味强度的增加而增高。3)在Curcumin抑制下,ApoD表达明显降低。结论:1) ApoD和AR在腋臭患者大汗腺组织中表达增高,可能在腋臭发病过程中起了重要作用。2) ApoD和AR可能在腋臭气味产生过程中起到非常关键的作用。3) Curcumin抑制了AP-1的活化导致ApoD表达降低。在腋臭的发病过程中,JNK1的下游转录因子AP-1对ApoD有明显的上调作用。

全文目录

缩略语表  5-7
中文摘要  7-10
英文摘要  10-14
前言  14-16
文献回顾  16-27
  一、腋臭发病机制的研究进展  16-20
  二、JNK 信号转导通路的研究进展  20-27
实验一大汗腺组织中ApoD 和AR 表达水平的检测  27-47
  1 材料  27-33
  2 方法  33-41
  3 结果  41-44
  4 讨论  44-47
实验二腋臭患者大汗腺组织中ApoD和AR的表达水平与气味强度之间的关系  47-52
  1 材料  47-48
  2 方法  48-49
  3 结果  49-50
  4 讨论  50-52
实验三腋臭患者腋区汗腺细胞中转录因子AP-1 在腋臭发病过程中的作用  52-61
  1 材料  52-54
  2 方法  54-57
  3 结果  57-58
  4 讨论  58-61
小结  61-62
参考文献  62-71
附录  71-73
个人简历和研究成果  73-74
致谢  74

腋臭患者大汗腺中ApoD和AR的表达变化及AP-1在其中的作用

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