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低硒对鸡胰腺SelW mRNA表达的调控及胰腺纤维化机制的研究

作　者: 王日华
导　师: 徐世文
学　校: 东北农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 硒鸡胰腺纤维化硒蛋白W
分类号: S831.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

硒是一种重要的生物必需微量营养素,在维持包括人在内的很多物种的正常生理功能中起着重要作用。研究发现,硒主要通过调控硒蛋白发挥其生物学作用。SelW是动物体内硒蛋白家族的重要成员之一。在禽类中,胰腺是鸡硒缺乏时最敏感的靶器官,缺硒可引起胰腺变性、坏死、萎缩、甚至纤维化。硒对胰腺的影响虽然早有一些报道,但这些报道大多都集中在病理组织学方面,硒在胰腺纤维化中的作用的机制尚未明确。本试验成功复制硒缺乏模型。一日龄雏鸡随机的分为三组。L组饲喂硒缺乏的基础日粮含硒量为0.033 mg/kg;M组和H组饲喂硒添加饲料硒含量分别为0.15和1.5 mg/kg。分别于15 d、25 d、35 d、45 d及55 d剖杀采胰腺组织,通过对受试鸡临床症状、剖检变化、胰腺显微结构的观察及羟脯氨酸含量、纤维化相关基因(TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3、MMP2、TIMP2)和硒蛋白W相关基因(SelW、SecS、SPS1)mRNA表达等方面的检测,研究硒缺乏致鸡胰腺纤维化的机制及日粮中不同硒水平对雏鸡胰腺组织中SelW及其合成代谢相关酶表达的影响。阐述SelW与纤维化的关系,结果表明:1.通过临床症状、病理剖检、显微结构的观察及纤维化相关指标Hyp含量的检测,表明硒缺乏可使鸡胰腺发生损伤,表现为坏死、萎缩及纤维化变化。2.通过对雏鸡胰腺组织中SelW、SecS及SPS1的检测,表明含硒量的高低可以影响胰腺组织中硒的含量及SelW、SecS、SPS1 mRNA的表达水平。高剂量的硒可以提高组织及全血中硒含量及SelW mRNA的表达水平,相反,缺硒能降低硒含量和SelW mRNA的表达水平。同时硒水平可影响SecS及SPS1 mRNA表达量。但其表达水平的变化对SelW表达的调控有待于进一步研究。3.通过荧光定量PCR的方法检测胰腺组织中TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3 mRNA表达量的变化,结果表明缺硒至胰腺纤维化时,TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3 mRNA表达水平升高,证实TGF-β/Smad通路在硒缺乏致胰腺纤维化的发展过程中起着重要的作用。这是硒缺乏致鸡胰腺纤维化的机制之一。4.通过对雏鸡胰腺组织中MMP2、TIMP2 mRNA表达量的检测,结果显示缺硒至胰腺纤维化时MMP2、TIMP2 mRNA的表达量增加,表明硒缺乏可以通过增加TIMP2表达量促进纤维化的发展。5.通过对血清及胰腺组织Hyp和SelW的相关性进行分析,结果表明两者呈一定的负相关。

全文目录

中文摘要  8-9
英文摘要  9-11
1 前言  11-18
  1.1 硒与胰腺  11-12
  1.2 硒对硒蛋白W 的影响  12-13
    1.2.1 硒蛋白W 的基因特性  12
    1.2.2 硒对硒蛋白W 表达的效应  12-13
  1.3 硒蛋白合成相关酶的调控  13-14
  1.4 TGFβ/Smads 通路与胰腺纤维化  14-16
    1.4.1 TGF-β超家族  15
    1.4.2 TGF-β家族受体  15-16
    1.4.3 TGF-β-Smads 信号通路  16
  1.5 实验的目的和意义  16-18
2 材料与方法  18-23
  2.1 主要仪器和试剂  18
    2.1.1 主要仪器  18
    2.1.2 主要化学与生物试剂  18
  2.2 实验动物及分组  18-19
  2.3 样品的采集和处理  19
  2.4 检测项目和方法  19-22
    2.4.1 临床症状的检查  19
    2.4.2 病理学的检查  19
    2.4.3 全血和胰腺中硒含量的检测  19-20
    2.4.4 血清及胰腺组织中羟基脯氨酸含量的检测  20
    2.4.5 实时定量PCR 法检测胰腺SelW、SecS、SPS1 基因以及纤维化相关基因TβRⅠTβRⅡ、Smad3、MMP2、TIMP2 mRNA 表达量的变化  20-22
  2.5 实验数据的统计及分析  22-23
3 结果与分析  23-48
  3.1 缺硒鸡的临床表现  23
  3.2 雏鸡胰腺组织病理学变化  23
    3.2.1 剖检变化  23
    3.2.2 胰腺病理组织学变化  23
  3.3 全血和胰腺组织中硒含量的检测结果  23-25
    3.3.1 雏鸡全血硒含量的检测结果  24
    3.3.2 雏鸡胰腺组织硒含量的检测结果  24-25
  3.4 胰腺SelW、SecS、SPS1 基因实时定量PCR 检测结果  25-33
    3.4.1 雏鸡胰腺SelW、SecS、SPS1 基因PCR 产物鉴定结果  25-26
    3.4.2 雏鸡胰腺SelW、SecS、SPS1 基因实时定量PCR 检测检测方法的建立  26-30
    3.4.3 雏鸡胰腺SelW、SecS 及SPS1 基因实时定量PCR 检测结果  30-33
  3.5 胰腺组织及血清中羟基脯氨酸的检测结果  33-35
    3.5.1 雏鸡血清中Hyp 含量的检测结果  33-34
    3.5.2 雏鸡胰腺组织Hyp 含量的检测结果  34-35
  3.6 胰腺纤维化相关基因TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3、MMP2、TIMP2 实时定量PCR 检测结果  35-46
    3.6.1 雏鸡胰腺TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3、MMP2、TIMP2 基因PCR 产物鉴定结果  35-38
    3.6.2 雏鸡胰腺TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3、MMP2 及TIMP2 基因实时定量PCR 检测检测方法的建立  38-42
    3.6.3 雏鸡胰腺TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3、MMP2 及TIMP2 基因实时定量PCR 检测结果  42-46
  3.7 雏鸡血清及胰腺组织Hyp 含量与SelW mRNA 表达水平的相关性分析  46-48
4 讨论  48-54
  4.1 雏鸡硒缺乏模型的建立  48-49
    4.1.1 临床症状的观察  48
    4.1.2 硒缺乏对雏鸡胰腺显微结构的影响  48
    4.1.3 硒缺乏对胰腺组织及血清羟脯氨酸含量的影响  48-49
  4.2 饲料硒含量对雏鸡胰腺组织SelW、SecS、SPS1 mRNA 表达水平的影响  49-50
  4.3 硒缺乏对胰腺TGFβ/Smads 通路的影响  50-52
  4.4 硒缺乏对基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响  52-54
5 结论  54-55
致谢  55-56
参看文献  56-63
附录  63-66
攻读硕士期间发表的学术论文  66

低硒对鸡胰腺SelW mRNA表达的调控及胰腺纤维化机制的研究

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