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猪流行性腹泻病毒细胞感染受体的生物学特性鉴定

作　者: 李宝贤
导　师: 李一经
学　校: 东北农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 受体猪氨基肽酶猪流行性腹泻病毒冠状病毒
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 317次
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内容摘要

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)可导致仔猪的严重腹泻，尤其在东亚各国传播非常广泛，每年都造成严重的经济损失。PEDV属于I群冠状病毒，同属于I群冠状病毒的猪流行性腹泻病毒、人冠状病毒229E、猫冠状病毒都以氨基肽酶作为细胞感染受体。而且据国外的报道，猪氨基肽酶(porcine aminopeptidase，pAPN)可以与PEDV病毒发生特异性结合，并且这种结合可以被抗pAPN的抗体抑制，但其是否就是PEDV的受体并没有定论。为了研究pAPN是否为PEDV的细胞感染受体，通过转染MDCK这种对PEDV是非许可性的细胞使其表达pAPN，并且用PEDV对转染后的细胞进行感染，我们发现转染可以使PEDV感染MDCK细胞而且病毒可以在这种细胞上连续传代。进一步的实验证实了抗pAPN的血清可以抑制PEDV对转染后的细胞的感染。而且通过western-blotting及免疫荧光实验确定了pAPN的表达，并用免疫荧光及用获得的PEDV对Vero细胞的感染鉴定了病毒抗原的存在。这些结果直接确定了，在转染后的MDCK里，pAPN的表达及病毒复制之间有着直接的联系。完全可以说明pAPN是PEDV的细胞感染受体。

全文目录

摘要  8-9
Abstract  9-10
1 引言  10-16
  1.1 PEDV病原学特性  10-12
    1.1.1 主要结构基因及其编码蛋白的功能特性  10
    1.1.2 M基因及其在PEDV检测中的应用  10-11
    1.1.3 S蛋白与其生物学特性  11-12
  1.2 病毒感染特性的研究  12-14
    1.2.1 PEDV的病毒培养  12
    1.2.2 病毒感染的分子生物学研究  12-13
    1.2.3 对冠状病毒受体的研究进展  13-14
  1.3 本实验研究的目的和意义  14-16
2 材料与方法  16-28
  2.1 实验材料  16-18
    2.1.1 质粒与菌种  16
    2.1.2 毒株和细胞  16
    2.1.3 主要试剂  16-17
    2.1.4 主要仪器设备  17-18
    2.1.5 试验动物及抗体  18
  2.2 实验方法  18-28
    2.2.1 病毒感染使用的PEDV的制备及鉴定  18-19
    2.2.2 pAPN基因的克隆  19-21
    2.2.3 连接有pAPN基因的真核表达载体的构建  21-24
    2.2.4 通过转染使pAPN在MDCK细胞膜上进行表达  24-26
    2.2.5 表达pAPN的MDCK细胞对PEDV易感性的研究  26-27
    2.2.6 抗pAPN抗体对PEDV感染抑制作用的研究  27-28
3 结果  28-36
  3.1 转染使pAPN在MDCK细胞膜上高效表达  28-30
  3.2 表达pAPN使MDCK细胞获得对PEDV的易感性  30-31
  3.3 PEDV可以在表达pAPN的MDCK细胞中增殖  31-33
  3.4 抗pAPN的抗体可以抑制PEDV的感染  33-36
4 讨论  36-39
  4.1 pAPN在MDCK细胞上的表达使其获得对PEDV的易感性  36
  4.2 pAPN是PEDV的细胞感染受体  36-37
  4.3 对pAPN在病毒感染中作用机理的两点假设  37
  4.4 本研究结果的理论及实践意义  37-39
5 结论  39-40
致谢  40-41
参考文献  41-47
附录  47-53
攻读学位期间发表的学术论文  53

猪流行性腹泻病毒细胞感染受体的生物学特性鉴定

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