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寡聚半乳糖醛酸的酶解制备及其铜螯合物对小鼠生长特性的影响

作　者: 孙丽娜
导　师: 石波
学　校: 中国农业科学院
专　业: 农产品加工与贮藏工程
关键词: 寡聚半乳糖醛酸 苹果果胶 分离纯化 结构测定 螯合物
分类号: S865.13
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 85次
引　用: 3次
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内容摘要


本文以来源丰富、价格低廉的商品苹果果胶为原料，用4种不同的商品果胶酶水解果胶和果胶酸制备寡聚半乳糖醛酸，通过多次对比试验，筛选得到产寡聚半乳糖醛酸的最佳果胶酶PectinexⅩⅩL，其优势底物为果胶酸，最佳条件为pH 5.5，55℃，反应30 min，酶和底物比1：10（底物浓度2％）；由离子色谱法和薄层层析法检测得知在此条件下寡聚半乳糖醛酸的产率大于54.3％，其中以二糖和三糖为主，产率分别为26.7％和27.6％；通过二次硅胶柱层析法将此条件下制备的寡聚半乳糖醛酸进行分离纯化，得到了31.8 mg半乳糖醛酸二糖组分和24.0 mg三糖组分；将此两种组分通过电喷雾电离质谱ESI-MS，一维核磁共振1H NMR、13C NMR和二维核磁共振1-1H COSY、1H-13C HMQC检测分析，结果为半乳糖醛酸二糖组分是由两分子半乳糖醛酸通过α-1，4糖苷键组成的不带有甲氧基的半乳糖醛酸二糖，半乳糖醛酸三糖组分是由三个半乳糖醛酸通过α-1，4糖苷键组成的不带有甲氧基的半乳糖醛酸三糖，其纯度均达到95％以上；将5％寡聚半乳糖醛酸水溶液，在常温下与等体积0.2 M CuSO4水溶液混匀，制备得到了寡聚半乳糖醛酸铜螯合物，得率为51.5％，其Cu2+含量为20.8％；在饲料中分别添加含等量Cu2+的寡聚半乳糖醛酸铜螯合物与CuSO4饲喂小鼠，发现需在饲料中添加含4倍以上份量Cu2+的CuSO4才能达到添加寡聚半乳糖醛酸铜螯合物的促生长效果；与添加CuSO4相比，添加寡聚半乳糖醛酸铜螯合物对减少小鼠肝脏、血液和粪便中的Cu2+含量效果显著，其减少率分别为38.3％、11.8％和52.0％。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-15
第1章 绪论  15-23
  1.1 寡聚糖醛酸简介  15-16
    1.1.1 寡聚糖醛酸定义及来源  15-16
    1.1.2 寡聚糖醛酸的生物功效  16
  1.2 寡聚半乳糖醛酸的研究进展  16-20
    1.2.1 寡聚半乳糖醛酸化学结构和理化性质  16
    1.2.2 寡聚半乳糖醛酸的来源  16-17
    1.2.3 寡聚半乳糖醛酸的检测  17
    1.2.4 寡聚半乳糖醛酸的分离纯化  17-18
    1.2.5 寡聚半乳糖醛酸的化学结构测定  18
    1.2.6 寡聚半乳糖醛酸的应用和潜在价值  18-19
    1.2.7 果胶生物酶法制备寡聚半乳糖醛酸的现状  19-20
  1.3 研究目的意义  20
  1.4 研究内容和目标  20-21
  1.5 技术路线  21-23
第2章 果胶酶降解果胶制备寡聚半乳糖醛酸  23-40
  2.1 引言  23
  2.2 实验材料  23-24
    2.2.1 主要试剂  23
    2.2.2 主要设备  23-24
  2.3 实验方法  24-26
    2.3.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测果胶酶  24-25
    2.3.2 果胶酸的制备(HATANAKA CHITOSE,1988)  25
    2.3.3 酶解反应pH的选择  25
    2.3.4 酶解反应温度的选择  25
    2.3.5 酶解反应加酶量的选择  25
    2.3.6 酶解反应时间的选择  25-26
    2.3.7 底物和酶的选择及产物组成的测定  26
  2.4 检测方法  26-28
    2.4.1 果胶酸酯化度的测定  26
    2.4.2 果胶酶酶活测定方法  26
    2.4.3 直接还原糖(DRS)的测定  26-27
    2.4.4 总还原糖(TRS)的测定  27-28
    2.4.5 寡聚半乳糖醛酸平均聚合度(DP)的计算方法  28
    2.4.6 薄层层析(TLC)法定性测定寡聚半乳糖醛酸  28
    2.4.7 离子色谱法(HPAEC)测定寡聚半乳糖醛酸  28
  2.5 结果与分析  28-39
    2.5.1 果胶酶SDS-PAGE电泳  28-29
    2.5.2 果胶酸酯化度的测定  29
    2.5.3 酶解反应pH的选择  29-31
    2.5.4 酶解反应温度的选择  31-32
    2.5.5 酶解反应加酶量的选择  32-33
    2.5.6 酶解反应时间的选择  33-35
    2.5.7 底物和酶的选择及产物组成的测定  35-39
  2.6 小结  39-40
第3章 寡聚半乳糖醛酸的分离纯化及结构鉴定  40-55
  3.1 引言  40
  3.2 实验材料  40-41
    3.2.1 原料  40
    3.2.2 层析柱及填料  40
    3.2.3 主要设备  40-41
  3.3 实验方法  41-42
    3.3.1 果胶酸的制备  41
    3.3.2 寡聚半乳糖醛酸的制备  41
    3.3.3 柱层析法二次分离纯化寡聚半乳糖醛酸  41-42
  3.4 检测方法  42-43
    3.4.1 果胶酸酯化度的测定  42
    3.4.2 总还原糖(TRS)的测定  42-43
    3.4.3 薄层层析(TLC)法定性测定寡聚半乳糖醛酸  43
    3.4.4 电喷雾电离质谱(ESI-MS)  43
    3.4.5 核磁共振(NMR,400M HZ)  43
  3.5 结果与分析  43-54
    3.5.1 果胶酸酯化度  43
    3.5.2 寡聚半乳糖醛酸冻干粉TRS的含量  43
    3.5.3 寡聚半乳糖醛酸的分离纯化  43-46
    3.5.4 纯化产物半乳糖醛酸二糖的化学结构分析  46-48
    3.5.5 纯化产物半乳糖醛酸三糖的化学结构分析  48-54
  3.6 小结  54-55
第4章 寡聚半乳糖醛酸铜螯合物的制备及其对小鼠生长特性的影响  55-64
  4.1 引言  55
  4.2 实验材料  55
    4.2.1 原料  55
    4.2.2 实验仪器  55
  4.3 实验方法  55-59
    4.3.1 寡聚半乳糖醛酸铜螯合物的制备  55-56
    4.3.2 寡聚半乳糖醛酸、寡聚半乳糖醛酸铜螯合物对小鼠生长特性的影响  56-59
  4.4 结果与分析  59-62
    4.4.1 反应时间对寡聚半乳糖醛酸铜螯合物制备的影响  59
    4.4.2 寡聚半乳糖醛酸铜螯合物的组成成分分析  59
    4.4.3 寡聚半乳糖醛酸及其铜螯合物对小鼠采食量的影响  59-60
    4.4.4 寡聚半乳糖醛酸及其铜螯合物对小鼠体重的影响  60-61
    4.4.5 寡聚半乳糖醛酸及其铜螯合物对小鼠肝脏、肾脏、血液和粪便中Cu~(2+)含量的影响  61-62
  4.5 小结  62-64
第5章 结论与建议  64-66
  5.1 结论  64
  5.2 创新点  64-65
  5.3 建议  65-66
参考文献  66-69
致谢  69-70
作者简介  70

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 狩猎、野生动物驯养 > 各种野生动物驯养 > 实验用动物 > 小白鼠
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