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蛋黄ACE抑制肽分离纯化研究

作　者: 万顺刚
导　师: 廖丹葵
学　校: 广西大学
专　业: 化学工艺
关键词: 蛋黄蛋白质 ACE抑制肽分离纯化
分类号: TQ464
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

蛋黄ACE抑制肽是蛋黄蛋白质经碱性蛋白酶水解所得的短肽混合物，具有明显的体外降压作用。本实验的研究旨在经系列的分离纯化程序，得到具有活性的降压肽，为充分利用丰富的蛋黄蛋白质，提高鸡蛋利用价值和促进农业资源有效利用提供参考。酶解液脱色实验研究结果表明，加入1.5％活性炭、温度40℃、pH4.0的条件下脱色40min，脱色率达到83％，肽损失率5.6％。用截留分子量为10kDa和3.5kDa超滤膜初步分离脱色酶解液，一级、二级超滤溶液温度分别为40℃和30℃、水解液浓度6％和操作压力0.3MPa时2种超滤膜具有较好的通量，可分别达到19L·m^-2·h^-1和1.3L·m^-2·h^-1；分别检测不同分子量段溶液ACE活性抑制率，结果显示ACE抑制肽主要集中在分子量小于3.5kDa溶液中，ACE活性抑制率达到51.3％。分子量小于3.5kDa的超滤液用离子交换和凝胶层析分离。当乙酸钠缓冲液pH4.1，洗脱液离子强度为1mol·L^-1 NaCl、进样量（肽的质量／树脂湿体积）为10mg·mL^-1，洗脱温度35℃、流速控制在0.5mL·min^-1时D61树脂具有较好分离效果，洗脱峰对ACE抑制活性提高到62.7％，肽的总回收率为82.4％。离子洗脱峰经Sephadex G-15凝胶层析分离。当缓冲液乙酸铵浓度为0.1 mol·L^-1、洗脱液流出速度0.5mL·min^-1、进样浓度40mg·mL^-1的条件下，肽的总回收率有90％，洗脱组分5^#峰具有最强的ACE抑制活性。洗脱组分5^#峰经RP-HPLC反相制备色谱分离，可以得到12种组分，经活性检测，ACE抑制活性最强组分位于5^#-a-a2，HPLC纯度达96％。放大实验表明，酶解工艺肽回收率81％；超滤放大肽回收率达76.8％；凝胶层析分离肽回收率达到68.8％。抗油脂氧化实验表明，油脂浓度为2.5％，ACEI浓度为0.02％时，ACE抑制肽与对照组具有相近的抗油脂氧化性。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
符号说明  8-12
第一章绪论  12-24
  1.1 前言  12-13
  1.2 ACE抑制肽的研究进展  13-17
    1.2.1 国外研究进展  14-15
    1.2.2 国内研究进展  15-17
  1.3 ACE抑制肽的制备及分离纯化  17-21
    1.3.1 ACE抑制肽的制备  17-18
    1.3.2 ACE抑制肽的分离纯化  18-20
    1.3.3 ACE抑制肽的评价  20-21
    1.3.4 目前存在主要问题  21
  1.4 研究的意义和内容  21-24
    1.4.1 研究目的意义  21-22
    1.4.2 研究内容  22-24
第二章酶解液的脱色研究  24-30
  2.1 前言  24
  2.2 实验药品及仪器  24
  2.3 实验方法  24-25
    2.3.1 检测波长的确定  24
    2.3.2 蛋白质浓度标准曲线制作  24-25
    2.3.3 脱色率及肽损失率计算  25
    2.3.4 脱色实验方法  25
  2.4 结果与讨论  25-29
    2.4.1 检测波长的确定  25-26
    2.4.2 蛋白质浓度与吸收度A的关系  26
    2.4.3 活性炭用量的影响  26-27
    2.4.4 pH值影响  27-28
    2.4.5 温度影响  28
    2.4.6 时间影响  28-29
  2.5 小结  29-30
第三章超滤法分离ACEI工艺研究  30-37
  3.1 前言  30
  3.2 实验药品及仪器  30-31
  3.3 实验内容  31
  3.4 计算方法  31-32
    3.4.1 肽回收率的计算  31
    3.4.2 活性检测  31-32
  3.5 结果与讨论  32-36
    3.5.1 浓度的影响  32-33
    3.5.2 温度的影响  33-34
    3.5.3 压力的影响  34
    3.5.4 时间的影响  34-35
    3.5.5 pH值的影响  35-36
    3.5.6 活性检测  36
  3.6 小结  36-37
第四章离子交换和凝胶层析法分离ACEI工艺研究  37-49
  4.1 前言  37
  4.2 实验药品及仪器  37-38
  4.3 实验方法  38-40
    4.3.1 离子分离纯化实验方法  38-39
    4.3.2 凝胶分离纯化实验方法  39-40
  4.4 结果与讨论  40-48
    4.4.1 离子分离纯化结果与讨论  40-45
    4.4.2 凝胶分离结果与讨论  45-48
  4.5 小结  48-49
第五章制备色谱初步分离ACEI及放大工艺研究  49-55
  5.1 前言  49
  5.2 实验药品及仪器  49-50
  5.3 实验方法  50-51
    5.3.1 制备色谱初步分离纯化方法  50
    5.3.2 放大实验方法  50-51
  5.4 结果与讨论  51-53
    5.4.1 制备色谱初步分离实验结果与讨论  51-52
    5.4.2 工艺放大实验结果与讨论  52-53
  5.5 小结  53-55
第六章蛋黄ACE抑制肽抗油脂氧化性实验  55-60
  6.1 前言  55
  6.2 实验药品及仪器  55
  6.3 实验方法  55-57
    6.3.1 硫代巴比妥酸(TBA)法  55-56
    6.3.2 硫氰酸铵法  56
    6.3.3 油脂过氧化抑制率的计算  56-57
  6.4 结果与讨论  57-59
    6.4.1 TBA法实验结果与讨论  57-58
    6.4.2 硫氰酸铵法实验结果与讨论  58-59
  6.5 小结  59-60
第七章结论与展望  60-61
  7.1 主要结论  60
  7.2 工作展望  60-61
参考文献  61-67
致谢  67-68
发表论文  68

蛋黄ACE抑制肽分离纯化研究

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