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Osterix在间充质干细胞向成骨细胞分化过程中作用的初步研究

作　者: 孟令仪
导　师: 刘文广
学　校: 东北师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 成骨分化转录因子 Runx2 Osterix HDAC TSA
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 88次
引　用: 1次
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内容摘要

在当今社会,骨骼疾病越来越受到人们的关注,因此对于骨的研究也就越来越深入。骨是一个动态的、复杂的组织,在它的形成以及发挥功能的过程中,受到了各种转录因子、信号通路、染色体改构复合物等因素的影响。其中Runx2和Osterix两种转录因子在成骨细胞分化、骨的发育、骨形成过程中起着决定性的作用,Osterix位于Runx2的下游,是Runx2的靶基因。本文主要对在间充质干细胞向成骨细胞分化过程中Osterix的作用做了初步的分析和研究。通过ALP染色和von Kossa染色及RT-PCR实验,我们发现在过表达Osterix的细胞中,Osterix可以促进间充质干细胞向成骨细胞分化,但是它的促分化能力却不及Runx2强,即使加入TSA, Osterix对成骨细胞分化影响也没有太大的变化。接着通过RT-PCR实验,我们检验到在间充质干细胞向成骨细胞分化的第6天,过表达Runx2的细胞中某些成骨细胞分化过程中标志性基因的表达在TSA的作用下发生了变化如骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)等;而在过表达Osterix的细胞系中标志性基因表达水平的改变并不像过表达Runx2的细胞系那么显著,有时候甚至会出现与过表达Runx2的细胞系相反的现象。所以HDAC对Osterix的作用也许并没有我们所想象的那么明显或是那么简单,组蛋白去乙酰化酶(HDAC)对成骨细胞的影响可能主要还是通过影响Runx2来实现的。我们的结果表明Osterix对成骨细胞的分化有一定的促进作用,但是作用要比Runx2弱。而在间充质干细胞向成骨细胞分化过程中,我们初步探索得到的结果是HDAC对Osterix的作用并没有我们所希望的那么显著,还需要在未来的实验中不断的探索。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
前言  8-14
  一、研究背景  8-12
    （一）骨发育  8
    （二）骨发育影响因子  8-10
    （三） HDAC 及 HDAC 抑制剂的研究进展  10-11
    （四） Osterix（Osx）与Runx2、HDAC之间的关系及展望  11-12
  二、研究内容与意义  12-14
材料与方法  14-19
  一、实验材料  14-15
    1 细胞及培养试剂  14
    2 质粒  14
    3 抗体  14
    4 引物  14
    5 试剂  14-15
    6 药品  15
    7 实验仪器  15
  二、实验方法  15-19
    1 细胞培养  15-16
    2 大肠杆菌感受态细胞的制备  16
    3 感受态细胞转化  16
    4 Western Blot  16-17
    5 ALP 染色  17
    6 von Kossa 染色  17
    7 稳转  17
    8 TRIZOL 法提取 RNA  17-18
    9 RT 反应  18
    10 PCR  18-19
结果与分析  19-26
  一、稳转细胞系的建立  19
  二、Osterix 在间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用  19-22
    1、ALP 检测  19-20
    2、成骨细胞未分化时标志性基因的检测  20-22
  三、HDAC 与 Osterix 关系的初步研究  22-26
    1 ALP 染色检测  22
    2 von Kossa 染色检测  22-23
    3 成骨细胞标志性基因的检测  23-26
讨论  26-28
  一实验方法的讨论  26
  二 HDAC 对 Osterix 作用的初步探索  26-27
  三 Runx2 和 Osterix 的对比分析  27-28
结论  28-29
参考文献  29-31
致谢  31

Osterix在间充质干细胞向成骨细胞分化过程中作用的初步研究

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