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蛹虫草的人工培养及其核苷类化合物的研究

作　者: 汪宇
导　师: 于荣敏
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 蛹虫草人工培养核苷类化合物腺苷虫草素抗癌活性高效毛细管电泳法高效液相色谱法
分类号: S567.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

本文主要探讨了蛹虫草的人工培养条件和对其代谢产物—核苷类物质进行的提取、分离、结构鉴定、含量测定及生物活性的研究。以菌丝的生长速度和产孢力为指标，筛选了蛹虫草斜面菌种培养基和较为合适的菌龄；以菌丝的发酵得率为指标，优化了人工培养蛹虫草液体培养基并考察了液体培养的外部条件；以子座干重为指标，优化了蛹虫草固体培养基。以人工培养蛹虫草子座为原料，分离得到腺苷、虫草素。 TLC实验证实固体培养蛹虫草子座、液体培养菌丝含有与野生蛹虫草子座、虫体相同的核苷类成分，如虫草素、腺苷等。HPCE法定量测定结果显示固体培养蛹虫草子座和液体培养蛹虫草菌丝中虫草素的含量可分别达野生子座的5.04和10.85倍。HPLC法测定固体培养蛹虫草白色和转黄菌皮中虫草素的含量分别为57.67mg／g和85.16mg／g。初步药理实验显示：人工培养蛹虫草中总核苷在体内和体外对肝癌H₂₂细胞有一定的抑制作用。同时，可延长荷瘤鼠的生存时间、改善其生存质量、抑制癌灶向其他脏器的转移。

全文目录

中文摘要  8-9
英文摘要  9-11
第一章绪论  11-17
  1.1 虫草属真菌人工培养技术的研究概况  11-12
  1.2 虫草属真菌中核苷类化合物的化学研究概况  12-14
  1.3 虫草属真菌中核苷类化合物的药理学研究概况  14-16
  1.4 立题依据  16-17
第二章蛹虫草液体培养条件的优化及生长动力学考察  17-35
  2.1 蛹虫草斜面菌种最适培养基的考察  17-20
    2.1.1 仪器与试剂  17-18
    2.1.2 菌株  18
    2.1.3 培养基的配制  18
    2.1.4 实验方法  18-19
    2.1.5 小结  19-20
  2.2 液体培养基的优化  20-27
    2.2.1 碳源的考察  20-21
    2.2.2 氮源的考察  21
    2.2.3 液体培养基C／N比的考察  21
    2.2.4 无机盐和微量元素的考察  21-22
    2.2.5 生长调节因子的考察  22
    2.2.6 优化培养基与原培养基的比较  22
    2.2.7 小结  22-27
  2.3 液体培养有关参数的考察  27-30
    2.3.1 装料系数的考察  27
    2.3.2 培养基PH影响的考察  27
    2.3.3 摇床振荡频率的考察  27
    2.3.4 接种量的考察  27-28
    2.3.5 培养液粘度的考察  28
    2.3.6 小结  28-30
  2.4 蛹虫草菌液体培养菌丝的生长动力学考察  30-34
    2.4.1 生长量的变化趋势考察  30
    2.4.2 培养基中残糖的测定  30-31
    2.4.3 小结  31-34
  2.5 实验结论  34-35
第三章蛹虫草的人工固体培养研究  35-43
  3.1 实验材料  35
    3.1.1 菌株  35
    3.1.2 培养基配制  35
  3.2 实验方法  35-36
    3.2.1 一级种子培养  35
    3.2.2 固体培养基的优化  35
    3.2.3 固体培养中子座的生长状况观察  35-36
  3.3 HPLC法测定固体培养基菌皮中核苷类化合物的含量  36-37
    3.3.1 实验仪器与试剂  36
    3.3.2 HPLC色谱条件  36-37
    3.3.3 实验方法  37
  3.4 实验结果  37-40
    3.4.1 固体培养基正交设计结果  38
    3.4.2 固体培养基菌皮中核苷类化合物的含量测定结果  38-40
  3.5 讨论  40-43
第四章人工培养蛹虫草子座中核苷类化合物的提取、分离和鉴定  43-50
  4.1 核苷类化合物的提取  43-44
    4.1.1 实验方法  43
    4.1.2 小结  43-44
  4.2 核苷类化合物的分离与鉴定  44-50
    4.2.1 仪器与试剂  44-45
    4.2.2 实验方法  45-46
    4.2.3 实验结果  46
    4.2.4 讨论  46-50
第五章蛹虫草及其培养物中核苷类化合物的检测  50-60
  5.1 核苷类化合物的薄层层析(TLC)定性鉴别  50-52
    5.1.1 仪器与试剂  50
    5.1.2 TLC层析条件  50-51
    5.1.3 薄层扫描条件  51
    5.1.4 实验结果  51-52
  5.2 核苷类化合物的高效毛细管电泳法(HPCE)测定  52-58
    5.2.1 实验仪器与试剂  52-53
    5.2.2 电泳条件的确定  53
    5.2.3 标准曲线与线性范围  53
    5.2.4 精密度试验结果  53-54
    5.2.5 样品分析  54-58
  5.3 讨论  58-60
第六章人工培养蛹虫草子座中核苷类化合物抗癌活性研究  60-66
  6.1 实验材料  60-61
    6.1.1 实验动物及瘤株  60
    6.1.2 实验药品与试剂  60
    6.1.3 实验仪器  60
    6.1.4 受试药物  60-61
  6.2 实验方法  61-62
    6.2.1 蛹虫草提取液的制备  61
    6.2.2 肝癌H_(22)细胞体外抗肿瘤试验  61
    6.2.3 肝癌H_(22)细胞体内抗肿瘤作用  61-62
  6.3 实验结果  62-65
    6.3.1 体外抑瘤作用结果  62-63
    6.3.2 体内抑瘤作用结果  63
    6.3.3 对生存延长率的影响  63-64
    6.3.4 对荷瘤小鼠生存质量的影响  64
    6.3.5 对肿瘤转移的影响  64-65
  6.4 讨论  65-66
第七章结论与讨论  66-70
  7.1 结论  66-67
  7.2 讨论  67-70
参考文献  70-74
附录  74-76
致谢  76

蛹虫草的人工培养及其核苷类化合物的研究

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