学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

拟除虫菊酯类农药的免疫和色谱分析方法研究

作　者: 胡礼鸣
导　师: 杨亚玲
学　校: 昆明理工大学
专　业: 化学工程
关键词: 拟除虫菊酯酶联免疫分析法固相萃取高效液相色谱法
分类号: TQ450.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 45次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

拟除虫菊酯类农药是一类仿生杀虫剂,具有性质稳定,无特殊臭味及安全系数高,使用浓度低等众多优点,被广泛应用于农业、工业以及家具害虫的防治中。越来越多的动物实验表明：拟除虫菊酯可能会影响神经系统的发展,会诱发癌症,抑制免疫系统,还可能干扰内分泌系统。因此,拟除虫菊酯类农药在农作物、食品以及环境中的残留分析具有重要的意义。本论文以拟除虫菊酯类农药作为研究对象,研究该类农药的的免疫分析方法和化学仪器分析方法。本文综述了拟除虫菊酯类农药的检测分析方法的研究进展,从样品的前处理方法、化学仪器分析方法及免疫分析方法的三个方面进行总结；综述了免疫分析方法的性能特点及其在生物、药品、食品和环境等复杂样品中的检测应用；在此基础上确定了本论文的选题。实验部分参考Sally K. Mak等的方法,合成溴氰菊酯的半抗原及全抗原。利用全抗原免疫动物,并采用杂交瘤技术获得PRD的单克隆抗体。通过间接ELISA法、SDS-PAGE电泳法对纯化后的抗体的特异性进行考察。结果表明,抗体属于1gG1型；SDS-PAGE确定分子量为168 kDa;PRD的抗体与固定化抗原的亲和常数为4.75×108 L/mol;抗体的特异性良好。以获得的抗体为基础采用间接竞争ELISA法对拟除虫菊酯进行检测分析。优化反应条件,得到一条检测拟除虫菊酯类农药的工作曲线。选用超市购买的铁观音茶叶作为实验检测样品,用间接竞争ELISA方法测得加标回收率。确定了间接竞争ELISA方法在37℃下反应1.5 hr,溶液环境为pH7.6的PBS溶液为最佳反应条件。间接竞争ELISA方法测定PRD的最低检测限为89 pg/mL,回收率均在90%以上。研究将生物素-亲和素放大体系应用到ELISA当中,建立更为灵敏的拟除虫菊酯类农药分析测定方法。生物素-亲和素放大体系测定PRD的最低检测限为5 pg/mL。选用固相萃取法(SPE)对茶叶样品做前处理,与HPLC构建PRD-SPE-HPLC离线分析体系,对茶叶中的四种拟除虫菊酯类农药(和一种异构体)进行检测。对PRD-SPE-HPLC系统的分析使用条件进行了优化考察,最终选定甲醇为洗脱溶剂,70%乙腈水溶液为分析溶剂。采用PRD-SPE-HPLC系统检测茶叶中农药的加标回收率,四种农药的回收率稳定达到80%以上,一种农药异构体的回收率达到72.9%。从样品处理、结果灵敏度等方面将PRD-SPE-HPLC多目标分析系统与ELISA方法进行讨论。实验发现免疫分析方法具有高灵敏度,简便,快捷的特点,在拟除虫菊酯类农残的检测中很有优势。生物技术与化学方法相结合将是分析检测工作的趋势。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
第一章绪论  9-25
  1.1 拟除虫菊酯类农药检测分析方法研究进展  9-23
    1.1.1 样品前处理方法的研究进展  10-13
    1.1.2 检测分析方法  13-18
    1.1.3 免疫分析法(Immunoassay)  18-23
  1.2 研究内容  23-25
第二章拟除虫菊酯全抗原及其单克隆抗体的制备  25-51
  2.1 引言  25-27
  2.2 拟除虫菊酯全抗原的制备  27-33
    2.2.1 实验原理与方法  27-29
    2.2.2 结果与讨论  29-33
  2.3 拟除虫菊酯单克隆抗体的制备  33-49
    2.3.1 前言  33-34
    2.3.2 实验原理与方法  34-41
    2.3.3 结果与讨论  41-49
  2.4 本章小节  49-51
第三章间接ELISA及生物素-亲和素放大体系结合ELISA检测茶叶中拟除虫菊酯类农药  51-66
  3.1 引言  51-53
  3.2 间接竞争ELISA法分析检测茶叶中的溴氰菊酯  53-62
    3.2.1 前言  53
    3.2.2 实验原理与方法  53-56
    3.2.3 结果与讨论  56-62
  3.3 生物素-亲和素放大体系结合ELISA测定PRD  62-65
    3.3.1 实验原理与方法  62
    3.3.2 结果与讨论  62-65
  3.4 本章小结  65-66
第四章固相萃取-高效液相技术检测茶叶中拟除虫菊酯类农药  66-74
  4.1 引言  66-67
  4.2 PRD-SPE-HPLC多目标分析系统的建立和应用  67-73
    4.2.1 实验原理与方法  67-68
    4.2.2 结果与讨论  68-73
  4.3 本章小结  73-74
第五章总结  74-77
参考文献  77-87
致谢  87-88
攻读硕士学位发表文章情况  88

拟除虫菊酯类农药的免疫和色谱分析方法研究

内容摘要

全文目录

相似论文