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橘皮提取物对口腔常见微生物抑制作用的研究

作　者: 张向宇
导　师: 李晓眠
学　校: 天津医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 橘皮提取物 细胞毒性 抑菌作用 牙菌斑 口腔微生态系 龋病 牙周病
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


龋病、牙周病是与牙菌斑生物膜相关的细菌感染性疾病。龋病的发病原因主要是菌斑中的细菌利用碳水化合物产酸、导致牙齿脱矿,继发侵入牙髓和根尖周围组织；牙周病的发病是菌斑中的致炎因子导致的牙周组织直接损害和间接免疫病理损害。研究发现,龋病长期不治疗,可以遗留慢性菌斑,成为牙源性病灶,使大量细菌滋生,蔓延至临近组织器官或通过血液／淋巴液循环传播到远处的组织器官,导致慢性直接和间接损害,例如细菌性心内膜炎、肾炎、关节炎等。慢性口腔细菌感染还可以引起面部临近的眼、耳、鼻等感染。最近研究发现,龋病和牙周病作为牙源性病灶还可以影响胚胎发育。变形链球菌是龋病和牙周病的始动因子,它首先附着在牙齿硬组织表面,产酸引起牙齿硬组织脱矿,继发其它细菌黏附,形成致病菌斑；金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌是口腔化脓感染及手术感染的主要致病因素；白假丝酵母菌是引发口腔院内交叉感染的重要原因,也是口腔修复体周围炎、口腔黏膜疾病、颌面部感染的主要病因。经口内途径的外科手术后感染等都是由口腔病原生物感染所引起。口腔中的微生物除细菌、真菌外,由唾液中或可检出HIV、HSV、EBV以及CMV等多种病毒。目前控制口腔感染主要使用化学制剂、抗生素、无机抗菌剂等方法。随着大量免疫抑制剂、广谱抗生素的应用,普遍开展整形外科、正畸技术；广泛进行放疗、化疗、器官移植,口腔细菌耐药和继发感染病例不断增加,口腔菌群失调的机会增加。目前,国际上对口腔感染控制的研究热点主要集中在两个方面,一是研究解决细菌耐药和口腔微生态系菌群失调问题,解决化学药物的毒性问题；二是控制细菌对牙齿的附着,防止菌斑形成。本研究的目的是探究天然植物成分(橘皮提取物OPE)对口腔主要致病病原生物变形链球菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌白假丝酵母菌的生长抑制作用；对变形链球菌对硬组织粘附作用过程的影响；检验OPE对单纯疱疹病毒的抑制作用,同时检验其细胞毒性作用。为开发新型、天然、无毒副作用的口腔局部抑菌剂、预防和控制口腔疾病特别是龋病和牙周病的发生和发展提供依据。方法一.将橘皮提取物按不同比例进行稀释,加入到含有细菌的培养基内,恒温37℃条件下培养24h,测量抑菌环直径,检验其对变形链球菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、白假丝酵母菌的生长抑制作用。二.利用细菌附着物洗脱液培养菌落记数方法,检测不同浓度的橘皮提取物对变形链球菌在光滑玻璃表面附着作用的抑制效应。三.利用扫描电镜观察橘皮提取物对变形链球菌附着形态的影响。四.利用扫描电镜观察橘皮提取物对未确定菌种粘附形态的影响。五.检验橘皮提取物对293细胞的毒性作用。六.采取MTT方法检测橘皮提取物对单纯疱疹病毒的灭活作用。结果一.橘皮提取物稀释1600倍仍对变形链球菌生长有抑制作用、稀释6400倍对金黄色葡萄球菌生长有抑制作用、稀释12800倍对白色葡萄球菌生长有抑制作用、稀释800倍对白假丝酵母菌的生长有抑制作用,抑菌作用强度与药物浓度有关。二.橘皮提取物稀释25600倍仍对变形链球菌的黏附有抑制作用。三.取橘皮提取物组和对照组变形链球菌附着玻片,在扫描电子显微镜下可见明显的细菌形态学改变。结果表明,橘皮提取物有抑制变形链球菌对光滑玻璃表面黏附的作用。四.在扫描电子显微镜下可见,橘皮提取物可以抑制未知杆菌对光滑玻璃表面的黏附。五.橘皮提取物有低度细胞毒性作用。六.橘皮提取物对单纯疱疹病毒有灭活作用。结论OPE对口腔常见微生物变形链球菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、白假丝酵母菌有抑菌作用；可以抑制变形链球菌等细菌对光滑玻璃表面的粘附；对单纯疱疹病毒有灭活作用。橘皮提取物在有效抑菌及抗病毒浓度未见明显细胞毒性反应。而且使用低浓度橘皮提取物对细菌仅有抑制其生长增殖和附着的作用,而不会全面杀死细菌,从而能够有效维持口腔内的微生态平衡。因此,橘皮提取物可作为一种天然、高效、安全的新型口腔局部抑菌剂、在口腔疾病特别是龋病和牙周病的预防和控制中发挥重要作用。

全文目录


中文摘要  5-9
英文摘要  9-12
前言  12-17
第一章 橘皮提取物抑菌实验  17-25
第二章 橘皮提取物抗变形链球菌附着实验  25-35
第三章 橘皮提取物对未知菌戮附的抑制作用  35-40
第四章 细胞毒性实验  40-44
第五章 抗单纯疱疹病毒实验  44-49
全文总结  49-51
参考文献  51-58
致谢  58-59
在读期间科研成绩  59-60
综述一:口腔常见致病菌的分布及检测手段和抑菌药物研究进展  60-78
综述二:橘皮提取物有效成分的提取及药理作用  78-85

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