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Piceatannol对佛波酯诱导MCF-10A细胞NF-κB激活和COX-2表达的抑制作用

作　者: 刘丹
导　师: 毕开顺；徐荣俊
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药学
关键词: NF-κB COX-2 Piceatannol TPA 白藜芦醇癌症炎症
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

现已有大量研究表明,慢性炎症与癌症的发生发展有着密切的联系。炎性细胞缓慢发展为肿瘤的病因已成为癌症研究的热点之一。环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)是前列腺素(PG)合成过程中一个重要的限速酶,主要在炎症细胞表达。COX-2在人类许多癌前病变和恶性肿瘤中均有高表达,从而促进肿瘤细胞增殖,抑制凋亡。前期研究表明,葡萄中大量存在的白藜芦醇(3,4,5-三羟基二苯乙烯,Resveratrol)可以有效抑制cox-2基因转录的调控转录因子NF-κB,从而起到抗炎,抗肿瘤的作用。白藜芦醇羟基衍生物Piceatannol(反-3,4,3′,5′-四羟基二苯乙烯),是在大戟属植物中被首次发现的,具有很强的抗炎、抗增殖等多种药理活性,但其内在的分子机制还不是很清楚。本课题旨在研究Piceatannol是否与其结构衍生物白藜芦醇一样具有抑制COX-2表达和NF-κB活化的药理活性,以及对其内在的分子机制进行初步的探讨。本实验研究表明,Piceatannol可有效拮抗佛波酯(12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋,TPA)诱导正常乳腺上皮细胞(MCF10A)cox-2基因的mRNA转录因子和蛋白表达水平。经Piceatannol处理过的MCF10A细胞可对TPA诱导的NF-κB DNA元件结合活性有很强的抑制作用,此作用在一定程度上超越了白藜芦醇和另一同类衍生物Oxyresveratrol(反-2,3′,4,5′-四羟基二苯乙烯)。因此,苯环上羟基数量的增加或减少以及羟基位置的改变对抑制NF-κB活性起重要作用。Piceatannol能够抑制TPA诱导的IκB的磷酸化与降解,从而阻止了p65亚基由胞质转移至核内。巯基还原剂二硫苏糖醇(DTT)可逆转Piceatannol对NF-κB DNA元件结合活性的抑制作用,其发生机制可能与调节IKK激酶结构域上半胱氨酸的还原态有关。Piceatannol对NF-κB转录活性的直接抑制作用及可能机制还在进一步的研究当中。

全文目录

摘要  9-10
ABSTRACT  10-11
第一章前言  11-19
  1.1 癌症的概念  11-14
  1.2 白藜芦醇及其衍生物Piceatannol的抗肿瘤作用  14-15
  1.3 COX-2炎性蛋白与癌症的关系  15-16
  1.4 转录因子NF-κB在炎症相关癌症中的作用  16-18
  1.5 AP-1  18-19
第二章 PIC对TPA诱导MCF-10A细胞NF-κB信号传导途径的抑制作用研究  19-30
  1 实验材料  19-21
    1.1 细胞  19
    1.2 药品与试剂  19-20
    1.3 实验仪器  20-21
  2 实验方法  21-25
    2.1 细胞培养  21
    2.2 MTT测定细胞活性  21
    2.3 EMSA凝胶迁移实验  21-23
    2.4 Western Blotting实验  23-24
    2.5 免疫细胞化学法  24-25
  3 实验结果  25-30
第三章 PIC对TPA诱导MCF-10A细胞COX-2表达的影响  30-35
  1 实验材料  30-31
    1.1 药品与试剂  30
    1.2 实验仪器  30-31
  2 实验方法  31-32
    2.1 细胞培养  31
    2.2 Western Blotting实验  31
    2.3 细胞总RNA提取和RT-PCR  31-32
  3 实验结果  32-35
第四章 PIC对NF-κB抑制机理的初步探讨  35-40
  1 实验材料  35-36
    1.1 药品与试剂  35
    1.2 实验仪器  35-36
  2 实验方法  36-37
    2.1 流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)的含量  36
    2.2 体外EMSA实验分析  36-37
  3 实验结果  37-40
第五章讨论  40-43
结论  43-44
参考文献  44-53
致谢  53

Piceatannol对佛波酯诱导MCF-10A细胞NF-κB激活和COX-2表达的抑制作用

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