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芩柏膏主要成分抑制Jurkat T细胞增殖活化的研究

作　者: 吴珺
导　师: 郝钰
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中西医结合基础免疫学
关键词: 汉黄芩素黄芩苷黄芩素芩柏软膏 T细胞活化小檗碱银屑病
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

银屑病俗称“牛皮癣”,是一种临床上常见的慢性炎症性、增生性皮肤病,本病常反复发作,难以根治,是皮外科重点研究疾病之一。近年来关于银屑病发病机制的研究取得了较大进展,现多认为银屑病是一种多基因遗传背景下的免疫异常性疾病,其中异常活化的T淋巴细胞及其产生的细胞因子起主要作用。有关银屑病中T细胞活化的机制及其调控已成为当前银屑病研究的热点。芩柏软膏由黄芩、黄柏组成,具有清热除湿、消肿止痛、养血活血、凉血解毒之功效,临床广泛用于治疗急性亚急性湿疹、银屑病、脓疱疮等多种皮肤科疾病,是赵炳南老中医自行研制的治疗银屑病的有效外用药,现为北京中医医院的院内制剂,临床配合凉血活血汤内服治疗进行期银屑病血热证卓有良效。本研究以Jurkat T细胞为模型,研究芩柏软膏中的主要成分小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对T细胞活化增殖的影响,为阐明芩柏软膏治疗银屑病的机制提供实验依据。实验一：小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对Jurkat T细胞的细胞增殖的影响。实验中将药物作用于细胞24h,采用MTT法检测细胞增殖的变化。结果显示：在体外培养条件下,小檗碱（40mg·L-1、20mg·L-1、10mg·L-1）、黄芩苷（200mg·L-1、100mg·L-1、50mg·L-1）、黄芩素（54mg·L-1、27mg·L-1、13.5mg·L-1）和汉黄芩素（8mg·L-1、4mg·L-1）作用24h,均能抑制Jurkat T细胞的增殖。实验二：检测小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对Jurkat T细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的影响。实验中将药物作用于细胞8h,采用酶联免疫吸附试验检测细胞分泌的细胞因子的变化。结果显示,小檗碱对IL-2、IFN-y和TNF-α的表达均有明显的抑制作用,黄芩苷对IL-2和IFN-γ有较明显的抑制作用,黄芩素对IFN-y和TNF-a有较明显的抑制作用,而汉黄芩素对这三种细胞因子不仅没有抑制作用,相反还对IL-2有刺激作用。实验三：小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对T细胞活化的早期标志CD69和中期标志CD25表达的影响。实验以二丁基佛波醇酯（phorbol 12, 13-dibutyrate, PDB）和离子霉素（Ionomycin, Ion）为刺激剂,采用单荧光染色流式细胞技术,检测Jurkat T细胞分别经PDB+Ion刺激4h和8h后,CD69和CD25的表达变化,以观察小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对Jurkat T细胞体外活化的影响。实验结果显示,在体外培养条件下,小檗碱(40mg·L^-1、20mg·L-1、10mg·L-1)、黄芩苷（200mg·L-1、100mg·L-1）、黄芩素（54mg·L-1、27mg·L-1、13.5mg·L-1）和汉黄芩素（8mg·L-1、4mg·L-1）均能抑制PDB+Ion刺激时Jurkat T细胞CD69的表达,且有剂量依赖性；而在对CD25的作用方面,只有小檗碱和汉黄芩素对CD25有明显的抑制作用。实验四：小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对T细胞活化信号游离Ca2+和PKC的影响。实验采用单荧光染色流式细胞技术和酶联免疫吸附实验检测Jurkat T细胞经PDB+Ion刺激24h后,Ca2+和PKC的变化。结果显示,这四种中药单体成分均不同程度地增强细胞内游离Ca2+的表达,同时抑制PKC的表达。研究结果表明：①小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素可明显抑制Jurkat T细胞的增殖,且小檗碱、黄芩苷和黄芩素对细胞因子的分泌有显著的抑制作用；②小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素可明显抑制Jurkat T细胞的活化标志CD69和CD25的表达；③小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对T细胞活化信号游离Ca2+有刺激表达的作用,但能有效抑制细胞中PKC的表达。研究结果提示,通过抑制T细胞活化的PKC信号途径,从而抑制T细胞的活化、增殖及细胞因子的分泌,可能是芩柏软膏治疗银屑病的机制之一。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
英文缩略词表  9-10
文献综述  10-40
  综述一银屑病的发病机制研究进展  10-24
    参考文献  19-24
  综述二银屑病的中西医治疗进展  24-40
    参考文献  34-40
实验研究  40-70
  前言  40-42
  实验一小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对Jurkat T细胞增殖的影响  42-46
    材料和方法  42-44
    结果  44-46
  实验二小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对Jurkat T细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α的影响  46-54
    材料和方法  46-48
    结果  48-54
  实验三小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对PDB+Ion诱导的Jurkat T细胞表面活化分子CD69和CD25的影响  54-62
    材料和方法  54-56
    结果  56-62
  实验四小檗碱、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对PDB+Ion诱导的Jurkat T细胞中信号分子游离Ca~(2+)和PKC的影响  62-70
    材料和方法  62-65
    结果  65-70
讨论  70-76
参考文献  76-80
结语  80-82
致谢  82-84
个人简历  84-85

芩柏膏主要成分抑制Jurkat T细胞增殖活化的研究

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