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青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2的表达及意义

作　者: 孙超
导　师: 邱勇
学　校: 南京医科大学
专　业: 外科学
关键词: 青少年脊柱侧凸成骨细胞单层培养骨密度 Runx2 BMP-2
分类号: R687.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2的表达及意义第一部分青少年成骨细胞的体外分离、培养、扩增及表型鉴定目的建立青少年成骨细胞(osteoblast,OB)体外分离、培养、扩增及表型鉴定的方法,为后续分子生物学检测做准备。方法试验对象为2008年03月至2009年04在我院行后路手术的女性AIS患者26例。根据测量的骨密度值,将AIS患者分为两组:A组15例,为骨量正常患者,年龄12~18岁,平均14.6岁;B组11例,为骨量减低患者,年龄12~18岁,平均14.8岁。所有受试者均需取右侧髂松质骨行植骨融合,在病人知情同意和不影响手术疗效的情况下取少许松质骨标本。胰蛋白酶预消化后植块法分离培养OB,原代培养并传至P2代行细胞记数,同时记录细胞样本各代的增值时间。取P2代细胞通过碱性磷酸酶染色、钙节结染色及RT-PCR检测骨钙素表达行OB的表型鉴定。结果两组胰蛋白酶预消化后植块法分离所得的原代OB均呈贴壁生长。体外培养第5~6天可见少量贴壁细胞,培养第4周见植块周围细胞密集,已呈重叠生长,植块间细胞也接近融合,细胞形态趋向较均匀的短梭形。P2代细胞总数平均可达0.5×107个。两组细胞各代平均增值时间无统计学差异(P>0.05),从P0～P2代平均约需45天。P2代细胞经碱性磷酸酶染色、钙节结染色及RT-PCR检测骨钙素表达鉴定证实获得和培养的细胞为典型的OB。结论1.植块法OB培养能获得大量原代成骨细胞的同时,较好地保持了其生物学特征,是一种较理想的人成骨细胞培养方法。2.两组AIS患者在体外分离、培养、扩增OB时所表现的生长及增殖特性一致。第二部分成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2的表达与青少年特发性脊柱侧凸患者骨量降低的关系目的从成骨细胞(osteoblast,OB)水平探讨核心结合因子ɑ1(Runx2)、骨形态发生蛋白-2 (bone morphogenetic proteins, BMP-2)与青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者骨量降低的关系。方法试验对象为2008年03月至2009年04在我院行后路手术的女性AIS患者26例。根据测量的骨密度值,将AIS患者分为两组:A组15例,为骨量正常患者,年龄12~18岁,平均14.6岁;B组11例,为骨量减低患者,年龄12~18岁,平均14.8岁。所有AIS患者均采用双能X线吸收测量仪(dual-energy x-ray absorptiometry,DEXA)测量骨密度(bone mineral density,BMD),测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。所有受试者术中取适量髂前上嵴的松质骨,运用植块法培养成骨细胞。培养至P2代使用RT-PCR和Western blotting检测两组中Runx2和BMP-2的mRNA及蛋白表达的情况。结果B组腰椎(L2~L4)及股骨近端的BMD值明显低于A组。RT-PCR和Western blotting显示:1.两组病例BMP-2的核酸及蛋白的表达量均无显著统计学差异(P>0.05)。2. B组中Runx2的核酸及蛋白水平的表达量均较A组低( P<0.05)。结论AIS骨量降低可能与OB细胞中BMP-2的表达强度无关。Runx2在OB水平核酸及蛋白表达强度的异常可能是导致AIS骨量降低的一个重要分子机制。

全文目录

中文摘要  3-6
英文摘要  6-10
缩略词表  10-11
前言  11-37
正文青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2 的表达及意义  37-74
  第一部分青少年成骨细胞的体外分离、培养、扩增及表型鉴定  37-49
    材料与方法  38-43
    结果  43-45
    讨论  45-47
    参考文献  47-49
  第二部分成骨细胞中核心结合因子ɑ1 和骨形态发生蛋白-2 的表达与青少年特发性脊柱侧凸患者骨量降低的关系  49-74
    资料和方法  49-56
    结果  56-63
    讨论  63-69
    参考文献  69-74
结论  74-75
文献综述  75-86
  参考文献  81-86
附录  86-92
攻读学位期间发表文章情况  92-94
致谢  94

青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2的表达及意义

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