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Hec1调节卵巢癌细胞对泰素敏感性的研究

作　者: 墨青青
导　师: 马丁
学　校: 华中科技大学
专　业: 妇产科学
关键词: Hec1 卵巢癌泰素敏感性有丝分裂检测点 MiR-133 RHOA蛋白乳腺癌细胞侵袭转移
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的耐药目前已经成为了恶性肿瘤治疗失败的重要原因。最近研究发现,Hec1作为调节有丝分裂检测点和着丝粒功能的基因,其在诸多肿瘤中呈现高表达并与部分肿瘤的不良预后有着明显的相关性。因此,我们通过RNAi干扰技术研究在卵巢癌细胞中Hec1对泰素化疗敏感性的影响。方法1)免疫组化检测Hec1在正常卵巢及卵巢癌中的表达情况。2)脂质体包裹Hec1 siRNA转染卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,其中转染对照siRNA及未转染细胞作为对照。3)Real-time PCR,western blot及细胞免疫荧光检测Hec1 siRNA对Hec1基因表达的干扰效应。4)MTT、流式细胞仪、western blot、细胞免疫荧光检测干扰Hec1后,卵巢癌细胞在泰素作用下的增殖、凋亡和周期改变情况。结果1)免疫组化结果显示,卵巢癌中Hec1的表达较正常卵巢明显增高。2)与未转染组和转染对照siRNA组相比,转染Hec1 siRNA 48小时后,Hec1 mRNA和蛋白表达水平均明显下调。细胞免疫荧光显示转染Hec1 siRNA 48小时后着丝粒上附着的Hec1亦出现明显的减少。3)MTT检测结果显示,Hec1 siRNA转染组与对照组相比,在相同泰素浓度下,细胞的活性明显降低,4)流式细胞术检测凋亡结果发现,用50nM泰素处理24小时后,Hec1 siRNA转染组的细胞凋亡率较对照组增加25%左右。5)细胞周期检测发现,Hec1 siRNA转染48小时细胞出现了较明显的周期阻滞,G2/M期细胞较对照组显著增加,但是subG1期细胞并无明显增加。同时western blot及免疫荧光检测有丝分裂期特异性蛋白H3P的表达发现H3P的表达明显增多。结论抑制Hec1表达后,激活了有丝分裂检测点,引起G2/M期阻滞细胞的增加,从而增加了细胞对泰素的敏感性。目的探讨MicroRNA-133(miR-133)通过调节RHOA蛋白的表达对乳腺癌低转移细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响。方法(1)将has-miR-133a inhibitor经脂质体包裹转入MCF-7细胞,以Negative control作为阴性对照,将未做任何处理的细胞作为空白对照。(2)通过qRT-PCR检测转染has-miR-133a inhibitor后MCF-7细胞中miR-133的表达情况。(3)Transwell试验和MTT检测miR-133对于MCF-7细胞迁移能力和增殖能力的影响。(4)细胞免疫荧光观察miR-133对于细胞骨架形态的影响。(5)Western blot检测miR-133对于RHOA蛋白表达的影响。结果(1)转染has-miR-133a inhibitor后MCF-7细胞中miR-133的表达较对照组明显减低。(2)Transwell试验和MTT结果表明抑制miR-133后可以增加细胞的迁移能力而对细胞的增殖能力没有影响。(3)细胞免疫荧光结果提示抑制miR-133后细胞骨架形态发生明显改变,细胞具有较强的侵袭转移特性。(4)Western blot结果提示抑制miR-133后RHOA的表达较两个对照组明显上调。结论miR-133可以通过调控RHOA蛋白的表达来抑制乳腺癌细胞系MCF-7的侵袭转移。

全文目录

第一部分 Hec1 调节卵巢癌细胞对泰素敏感性的研究  5-28
  中文摘要  5-6
  Abstract  6-7
  前言  7-8
  实验材料与方法  8-15
  实验结果  15-23
  讨论  23-25
  参考文献  25-28
第二部分 MiR-133 通过 RHOA 蛋白调节乳腺癌细胞系 MCF-7 的侵袭转移  28-36
  摘要  28-29
  Abstract  29-30
  前言  30
  材料和方法  30-31
  实验结果  31-34
  讨论  34-35
  参考文献  35-36
综述  36-48
  参考文献  43-48
致谢  48-50

Hec1调节卵巢癌细胞对泰素敏感性的研究

内容摘要

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