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AGR2单克隆抗体18A4抑制乳腺癌细胞的生长和迁移

作　者: 李坤
导　师: 李大伟
学　校: 上海交通大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: AGR2 单克隆抗体乳腺癌细胞生长细胞迁移
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 37次
引　用: 1次
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内容摘要

单克隆抗体在肿瘤的诊断与治疗中发挥了重大的作用,将新的可促进肿瘤生长或转移的分泌性抗原作为抗体阻断靶标具有重大的意义。Anterior Gradient-2(AGR2)在一系列腺癌中都存在过表达,而且诸多证据表明,AGR2表达与肿瘤生成和转移密切相关。不仅在很多肿瘤细胞的胞质中,可检测到AGR2,而且在多种腺癌细胞的上清中也有AGR2的表达。有证据表明,AGR2在胞外有促进细胞增殖和迁移的作用。因此,AGR2是一个很有前景的基于抗体治疗的抗肿瘤靶标。本研究探索了将AGR2作为抗肿瘤靶标的可行性,在获得抗AGR2单克隆抗体杂交瘤18A4的基础上,对表达AGR2的三种乳腺癌细胞进行生长和迁移抑制实验,发现AGR2单克隆抗体18A4可抑制MCF-7、T47D的生长和T47D细胞的迁移作用。为后续AGR2胞外功能研究以及将AGR2作靶标进行肿瘤免疫治疗提供了必要的前期物质基础。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-9
第一章绪论  9-17
  1.1 乳腺癌  9-10
  1.2 AGR2 与肿瘤  10-11
    1.2.1 AGR2 的发现  10
    1.2.2 AGR2 促进肿瘤生长和迁移  10-11
  1.3 AGR2 的结构、细胞分布及潜在的结合蛋白  11-13
    1.3.1 AGR2 一级结构及已知功能区域  11
    1.3.2 AGR2 蛋白的细胞分布以及以发现的结合蛋白  11-13
  1.4 AGR2 作为诊断指标  13-14
  1.5 AGR2 作为肿瘤治疗靶标的可行性及意义  14-15
  1.6 18A4 杂交瘤细胞株  15
  1.7 课题意义及研究内容  15-17
第二章材料与方法  17-24
  2.1 材料  17-18
    2.1.1 细胞株  17
    2.1.2 实验动物  17
    2.1.3 主要试剂  17
    2.1.4 主要仪器  17-18
  2.2 方法  18-24
    2.2.1 单克隆抗体18A4 的制备和纯化  18-20
    2.2.2 乳腺癌细胞MCF-7、T47D、 MDA-MB-231 中AGR 表达检测  20-21
    2.2.3 18A4 对乳腺癌细胞MCF-7、T47D、 MDA-MB-231 抑制作用检测  21-24
第三章实验结果  24-39
  3.1 18A4 单克隆抗体的纯化  24-25
    3.1.1 18A4 抗体纯化后抗体纯度提高  24
    3.1.2 ELISA 实验检测出18A4 抗体纯化后抗体是稳定的  24-25
    3.1.3 考马斯亮蓝G250 法测定18A4 抗体浓度  25
  3.2 乳腺癌细胞MCF-7、 T47D、 MDA-MB-231 细胞质中都可检测到 AGR2 的表达  25-29
    3.2.1 免疫印记检测乳腺癌细胞 MCF-7、 T47D、 MDA-MB-231 中AGR2 的表达  25-26
    3.2.2 免疫荧光检测到乳腺癌细胞 MCF-7、 T47D、 MDA-MB-231 中 AGR2 的表达  26-29
    3.2.4 18A4 免疫沉淀检测到乳腺癌细胞T47D 上清中的AGR2  29
  3.3 18A4 抑制乳腺癌细胞MCF-7 和T47D 细胞的生长和细胞周期  29-35
    3.3.1 MTT 实验结果可看出18A4抑制了T47D细胞和MCF-7细胞的生长  29
    3.3.2 18A4 抑制乳腺癌细胞MCF-7 和T47D 细胞周期  29-35
  3.4 18A4 对乳腺癌细胞T47D 的迁移有抑制作用  35-39
    3.4.1 18A4 对乳腺癌细胞T47D 的迁移有抑制作用  35-36
    3.4.2 AGR2 可促进细胞的迁移，单克隆抗体AGR2 对这种促进有抑制  36-39
第四章讨论  39
第五章结论  39-40
参考文献  40-43
致谢  43-44
附录一符号说明  44-45
附录二溶液配制  45-47

AGR2单克隆抗体18A4抑制乳腺癌细胞的生长和迁移

内容摘要

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