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前列腺素E_2对人肝细胞癌HepG2细胞E-cadherin表达的影响及其分子机制研究

作　者: 杨洪宝
导　师: 冷静
学　校: 南京医科大学
专　业: 病理学
关键词: 前列腺素E2 环加氧酶-2 上皮性钙黏蛋白 蛋白激酶B 人肝细胞癌
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


研究背景:肝细胞性肝癌（human hepatocellular carcinoma, HCC）是世界范围的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势,我国每年约有30万人死于肝癌,在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于肺癌居第2位。肝癌高死亡率的原因在于肝癌的复发转移是其治疗中的最大障碍之一,对其机制的研究一直是国内外的研究热点。在许多肿瘤细胞和肿瘤组织中都有环加氧酶-2（COX-2）的高表达;环加氧酶-2（COX-2）具有促进肿瘤细胞生长、促进肿瘤血管生成的作用,其主要产物为前列腺素E2（PGE2）,PGE2可以通过诱导肿瘤血管增生,抑制局部免疫功能,调节多种信号转导通路而影响细胞的增殖,抑制细胞凋亡,促进肿瘤细胞的生长;PGE2还具有促进肿瘤细胞迁移、侵袭、转移的作用。上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）是细胞间连接的主要成分。E-cadherin介导细胞与细胞之间的黏附,维持细胞结构和形态的稳定。其表达下调可能降低细胞间的黏附,使细胞相互分离,造成细胞的脱落和扩散,促使癌细胞局部侵袭,进而发生远处转移。Mariam Dohadwala等报道了在非小细胞肺癌（NSCLC）中,PGE2可以抑制癌细胞E-cadherin的转录、表达,而在肝癌中未见报道,本研究试图了解COX-2及其产物PGE2对肝癌细胞E-cadherin表达的调节作用,并探索其可能的信号转导通路。研究目的:研究PGE2对人肝细胞癌HepG2细胞E-cadherin表达的调节作用及其分子机制,探讨其与肝癌侵袭转移的关系,为肝癌的治疗提供新的研究思路。研究方法:1.细胞培养:取人肝细胞癌细胞株HepG2按常规方法培养。2.人肝细胞癌HepG2细胞瞬时转染COX-2后,western blot实验检测其E-cadherin表达的变化。3.不同浓度PGE2处理培养的HepG2细胞,western blot实验检测其E-cadherin表达的变化。4.外源PGE2处理培养的HepG2细胞不同时间,应用RT-PCR和western blot实验分别测定细胞内E-cadherin mRNA水平和蛋白水平的变化。5.外源PGE2处理培养的HepG2细胞0min、5min、15min、30min、45min、60min后,western blot实验检测Akt的磷酸化水平。6.设对照组、PGE2处理组、PGE2+ LY294002处理组和LY294002处理组,用western blot实验检测E-cadherin蛋白表达水平的变化。研究结果:1. HepG2细胞过表达转染COX-2后,E-cadherin的表达显著降低,与PCDNA3空载质粒对照组比较下降了30.5%,差异有显著性（P<0.05）。2. 5、10、20μM PGE2处理HepG2细胞24 h后,E-cadherin表达水平与对照组比较分别下降了22.31%、36.3%、47.83%,差异有显著性（p<0.05）。3. 20μM PGE2处理HepG2细胞24h、48h、72h后,RT-PCR实验结果显示:E-cadherin的mRNA表达水平与对照组比较分别下降了21.78%、48.11%、45.02% （p<0.01）。E-cadherin的蛋白表达水平与对照组比较分别下降了39.23%、55.56%、77.76%（p<0.01）。4. 20μM PGE2处理培养的HepG2细胞0min、5min、15min、30min、45min、60min后,western blot实验显示:Akt的磷酸化水平与0min比较分别增加了135.28%、192.68%、152.29%、152.96%、129.67%（p<0.01）,在15min时达到最高水平。5. PI-3K抑制剂LY294002作用HepG2细胞30min后再加入20μM PGE2培养24h,western blot实验结果表明20μM PGE2处理组E-cadherin的表达水平与对照组相比下降了40.88%（p<0.01）,而PGE2+LY294002处理组E-cadherin的表达水平恢复到了基础水平,与对照组比较无统计学差异,与PGE2处理组比较差异有显著性（△△P<0.01,图6）;LY294002单独处理组E-cadherin的表达水平仍然处在基础水平。研究结论:1. COX-2过表达能显著抑制HepG2细胞E-cadherin的表达。2. PGE2能明显抑制HepG2细胞E-cadherin蛋白和mRNA的表达,并呈现剂量和时间依赖性。3. PGE2很可能通过激活Akt信号转导通路而发挥对E-cadherin表达的调节作用。

全文目录


中文摘要  4-7
Abstract  7-11
前言  11-15
  参考文献  12-15
材料与方法  15-26
实验结果  26-33
讨论  33-37
研究小结  37-38
参考文献  38-42
综述：E-cadherin 黏附系统与恶性肿瘤侵袭转移的关系  42-57
  参考文献  52-57
附录：英文缩略词表  57-58
攻读学位期间发表文章情况  58-59
致谢  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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