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河南道地药用植物辛夷内生真菌Y111的初步研究

作　者: 刘笑洁
导　师: 何佳
学　校: 河南科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 内生真菌辛夷发酵条件抗菌菌种鉴定挥发油成分
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

内生真菌是指那些在其生活史中某一段时期生活在活的植物组织中,并不引起植物组织产生明显病害症状的真菌。近年来,研究表明内生真菌可以产生抗菌,抗肿瘤等的活性物质。因此,作为一种新型的具有潜在开发价值的微生物资源,内生真菌已得到人们的广泛认同。现阶段对药用植物抗菌内生真菌的研究才刚刚起步,对其了解也不够深入,无法对它们充分利用。因此,研究药用植物抗菌内生真菌不仅能带来巨大的社会效益,还具有现实的理论意义。本文选用药用植物辛夷内生真菌Y111为对象进行研究,研究结果如下:1.通过对不同固体培养基菌丝长势的分析,筛选出适合Y111菌株生长的固体培养基为PDA培养基;通过对不同液体培养基中Y111的生物量及抑菌效果的分析,筛选出适合Y111生长的液体培养基为PDA培养基。以PDA培养基为基础,用单因素及正交试验对Y111菌株的发酵培养基进行优化,得到适宜菌丝生长的最佳培养基为:在20%土豆汁中加入4%葡萄糖、0.3%蛋白胨、0.1%K₂HPO₄;抑菌效果最好的发酵培养基为:在20%土豆汁中加入4%葡萄糖、0.3%蛋白胨、0.2%K2HPO4。用单因素和正交试验对Y111菌株发酵条件进行优化,抑菌效果为指标,得到最佳的培养条件为:接种量为12%、装液量为100mL/250mL、温度28℃、培养时间12天。2.通过测定Y111对部分细菌和真菌的抗菌效果,得到Y111的部分抗菌谱。进一步研究发现Y111发酵液对pH、温度和紫外线都有很好的稳定性。Y111抗菌效果,可能与发酵后期产生的次生代谢产物有关;对Y111抗真菌的显微及直观观察,发现抗菌作用可能与重寄生作用和生长竞争作用有关。这些还有待进一步研究。3.以形态学和分子生物学手段对辛夷内生真菌Y111进行鉴定。形态学的鉴定得到Y111菌株是多节孢属。通过分子鉴定结果得到,Y111的ITS序列和炭团菌属真菌相似性较高,达94%,与多节孢属的相似性91%。根据rDNA ITS区序列分析的一般准则,Y111菌株为炭团菌属真菌。真菌的鉴定以形态学鉴定为主,因此Y111菌株为多节孢属。4.通过对辛夷内生真菌Y111挥发油化学成分的气相色谱-质谱联用分析,发现了辛夷内生真菌Y111与其宿主植物辛夷含有相同的化学成分,他们分别是石竹烯、E,E-金合欢醛、桉树脑等,并且这些成分大都是辛夷植物中的主要成分。

全文目录

摘要  2-4
ABSTRACT  4-9
第1章文献综述  9-19
  1.1 植物内生真菌的研究概况  9-15
    1.1.1 内生真菌的定义  9
    1.1.2 植物内生真菌的多样性  9-11
    1.1.3 内生真菌的鉴定方法  11-12
    1.1.4 内生真菌活性代谢产物的研究进展  12-15
  1.2 辛夷资源利用研究概况  15-17
    1.2.1 我国古代辛夷利用  15
    1.2.2 辛夷的主要化学成分  15-16
    1.2.3 辛夷的药理作用  16-17
  1.3 本课题研究的目的和意义  17-18
  1.4 本课题研究主要内容  18-19
第2章辛夷内生真菌 Y111 培养特性的研究  19-39
  2.1 材料及仪器  19-21
    2.1.1 试验菌种  19
    2.1.2 培养基  19-20
    2.1.3 仪器  20-21
    2.1.4 试剂  21
  2.2 试验方法  21-26
    2.2.1 菌种活化  21
    2.2.2 摇瓶发酵培养  21
    2.2.3 固体培养基的选择  21
    2.2.4 液体培养基的选择  21
    2.2.5 发酵培养基的优化  21-22
    2.2.6 发酵条件的优化  22-23
    2.2.7 检测方法  23-26
  2.3 结果与讨论  26-38
    2.3.1 固体培养基的选择  26-27
    2.3.2 液体基本培养基的选择  27-28
    2.3.3 发酵培养基的优化  28-33
    2.3.4 发酵条件的优化  33-36
    2.3.5 Y111 的发酵曲线  36-38
  2.4 小结  38-39
第3章 Y111 菌株抗菌物质理化性质及抗菌机理研究  39-50
  3.1 材料及仪器  39-40
    3.1.1 试验菌种  39
    3.1.2 仪器  39-40
  3.2 试验方法  40-41
    3.2.1 发酵液的处理  40
    3.2.2 指示菌悬液的制备  40
    3.2.3 杯碟法抑细菌实验  40
    3.2.4 抗真菌的检测法（平板对峙法）  40
    3.2.5 菌株抗菌谱的测定  40
    3.2.6 抗菌活性物质理化性质的研究  40-41
    3.2.7 抗菌机理初步分析  41
  3.3 结果与讨论  41-49
    3.3.1 发酵液的抑细菌作用  41-42
    3.3.2 抑制真菌作用  42-43
    3.3.3 辛夷内生真菌Y111 的抗菌谱  43-44
    3.3.4 抗菌活性物质理化性质的研究  44-46
    3.3.5 抗菌机理初步研究  46-49
  3.4 小结  49-50
第4章 Y111 菌种鉴定  50-60
  4.1 材料及仪器  50-51
    4.1.1 试验菌株  50
    4.1.2 培养基  50
    4.1.3 试剂  50-51
    4.1.4 仪器  51
  4.2 试验方法  51-53
    4.2.1 形态学鉴定  51-52
    4.2.2 rDNA ITS 序列分析  52-53
  4.3 结果与讨论  53-59
    4.3.1 菌落形态分析  53
    4.3.2 个体形态  53-54
    4.3.3 rDNA ITS 测序鉴定  54-59
  4.4 小结  59-60
第5章气质联用测定 Y111 挥发油成分  60-67
  5.1 材料及仪器  60-61
    5.1.1 试验菌种  60
    5.1.2 试剂  60
    5.1.3 仪器  60-61
  5.2 试验方法  61
    5.2.1 样品制备  61
    5.2.2 色谱条件  61
  5.3 结果与讨论  61-66
    5.3.1 气相色谱分析  61-62
    5.3.2 气质联用分析  62-66
  5.4 小结  66-67
第6章结论与展望  67-69
  6.1 结论  67
  6.2 展望  67-69
参考文献  69-74
致谢  74-75
攻读硕士学位期间的研究成果  75

河南道地药用植物辛夷内生真菌Y111的初步研究

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