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山药糖蛋白的分离纯化研究

作　者: 邵海
导　师: 龚钢明
学　校: 上海海洋大学
专　业: 应用化学
关键词: 山药糖蛋白微波技术纯化分子量抗氧化活性
分类号: TQ914.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

糖蛋白是一种由糖类同多肽或蛋白质以共价键连接而形成的结合蛋白。研究发现,糖蛋白具有调节免疫、抑制肿瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等作用,对于提高人们的健康水平具有广阔的运用前景。本文研究了山药糖蛋白的微波辅助提取、水浴浸提、纯化、分子量测定及其抗氧化活性,主要结论概述如下：1.对微波辅助提取中的微波功率、微波辅助提取时间、液料比三个因素进行了正交试验,并进行了极差分析和方差分析,结果如下：①最佳提取条件为微波功率为200 W、微波辅助提取时间为1 min、液料比为10 mL/g。②影响山药糖蛋白得率的主要因素是微波功率,其次是微波辅助提取时间、液料比,其中微波功率和微波辅助提取时间对得率的影响显著,而液料比对得率有一定的影响。③验证了最佳提取条件,结果表明在该条件下提取,糖蛋白得率的平均值为1.871%。2.对水浴浸提中的水浴温度、水浴浸提时间、液料比三个因素进行了正交试验,并进行了极差分析和方差分析,试验表明：①最佳提取条件为水浴温度为40℃、水浴浸提时间为2 h、液料比为10mL/g。②影响山药糖蛋白得率的主要因素是水浴温度,其次是液料比、水浴浸提时间。水浴温度、液料比和水浴浸提时间对得率的影响都不大。③验证了最佳提取条件,结果表明在该条件下提取,糖蛋白得率的平均值为1.007%。3.河南山药糖蛋白经DEAE-52及Sephadex G-75柱层析纯化,得到两种糖蛋白组分GLP-Ⅰ和GLP-Ⅱ。用聚丙烯酰胺凝胶电泳对这两种糖蛋白进行纯度鉴定及分子量测定。结果表明GLP-Ⅰ和GLP-Ⅱ都达到电泳纯,其分子量分别为13000 Da和38000 Da。4.江苏山药糖蛋白经DEAE-52及Sephadex G-75柱层析纯化,得到一种糖蛋白组分。用聚丙烯酰胺凝胶电泳对该糖蛋白进行纯度鉴定及分子量测定。结果表明该糖蛋白达到电泳纯,其分子量为35200 Da。5.通过测定羟基自由基清除率及类SOD活性的方法,考察山药糖蛋白的抗氧化活性。结果表明山药糖蛋白有清除羟基自由基及增强类SOD活性的作用,因此山药糖蛋白具有一定的抗氧化能力。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-12
第一章绪论  12-26
  1.1 山药  12-16
    1.1.1 主要化学成分  12-13
    1.1.2 活性成分的提取与分离  13-14
    1.1.3 生物学功能  14-16
  1.2 植物糖蛋白  16-22
    1.2.1 糖蛋白的分类、组成和结构  16-19
    1.2.2 糖蛋白的提取与分离  19-20
    1.2.3 生物学功能  20-22
  1.3 课题研究的意义和内容  22
    1.3.1 课题研究的意义  22
    1.3.2 课题研究的内容  22
  参考文献  22-26
第二章检测方法  26-35
  2.1 前言  26
  2.2 材料与试剂  26-27
  2.3 仪器与设备  27
  2.4 山药含水量测定  27
  2.5 微量凯氏定氮法  27-31
    2.5.1 原理  27-28
    2.5.2 试剂配制  28-29
    2.5.3 牛血清清蛋白试验方法  29-30
    2.5.4 数据处理  30-31
  2.6 标准曲线制作  31-33
    2.6.1 葡萄糖标准曲线  31-32
    2.6.2 蛋白质标准曲线  32-33
  2.7 本章小结  33
  参考文献  33-35
第三章山药糖蛋白提取工艺优化  35-49
  3.1 前言  35
  3.2 微波辅助提取的原理  35-36
  3.3 材料与试剂  36
  3.4 仪器与设备  36-37
  3.5 微波辅助提取山药糖蛋白  37-43
    3.5.1 单因素试验方法  37-40
    3.5.2 正交试验方法  40-43
  3.6 水浴浸提山药糖蛋白  43-47
    3.6.1 单因素试验方法  43-45
    3.6.2 正交试验方法  45-47
  3.7 本章小节  47-48
  参考文献  48-49
第四章山药糖蛋白的分离和纯化  49-60
  4.1 前言  49
  4.2 材料与试剂  49-50
  4.3 仪器与设备  50
  4.4 山药糖蛋白的分离  50-52
    4.4.1 料液分离  50-51
    4.4.2 Sevage法除游离蛋白  51
    4.4.3 脱残余溶剂  51
    4.4.4 透析  51-52
    4.4.5 醇析  52
    4.4.6 复溶  52
  4.5 山药糖蛋白的纯化  52-58
    4.5.1 阴离子交换纤维素DEAE-52柱层析  53-55
    4.5.2 葡聚糖凝胶Sephadex G-75柱层析  55-58
  4.6 冷冻干燥  58
  4.7 本章小结  58-59
  参考文献  59-60
第五章山药糖蛋白的分子量测定  60-70
  5.1 前言  60-61
  5.2 材料与试剂  61
  5.3 仪器与设备  61
  5.4 试剂配制  61-64
    5.4.1 标准蛋白质  61-62
    5.4.2 不连续系统SDS-PAGE试剂配制  62-63
    5.4.3 固定液  63
    5.4.4 染色液  63-64
    5.4.5 脱色液  64
  5.5 凝胶的制备  64-65
    5.5.1 分离胶的制备  64-65
    5.5.2 浓缩胶的制备  65
    5.5.3 氧气的影响  65
  5.6 样品的处理与加样  65-66
    5.6.1 样品的处理  65-66
    5.6.2 加样  66
  5.7 电泳  66
  5.8 染色与脱色  66-67
  5.9 数据处理  67-68
  5.10 本章小结  68-69
  参考文献  69-70
第六章山药糖蛋白的抗氧化活性  70-77
  6.1 前言  70
  6.2 材料与试剂  70-71
  6.3 仪器与设备  71
  6.4 羟基自由基清除率的测定  71-73
    6.4.1 a-脱氧核糖法机理  71
    6.4.2 试剂配制  71-72
    6.4.3 试验方法  72
    6.4.4 数据处理  72-73
  6.5 类SOD活性的测定  73-76
    6.5.1 邻苯三酚自氧化法机理  73-74
    6.5.2 试剂配制  74
    6.5.3 试验方法  74-75
    6.5.4 数据处理  75-76
  6.6 本章小结  76
  参考文献  76-77
第七章总结与展望  77-80
  7.1 总结  77-79
    7.1.1 分析实验研究  77
    7.1.2 提取方法研究  77-78
    7.1.3 纯化方法研究  78
    7.1.4 分子量测定研究  78-79
    7.1.5 功能特性研究  79
  7.2 展望  79-80
致谢  80-81
在读期间发表论文  81

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