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As_2O_3/Mn_（0.5）Zn_（0.5）Fe_2O_4复合纳米粒的制备及联合磁感应加热治疗宫颈癌的实验研究

作　者: 倪海燕
导　师: 张东生
学　校: 东南大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁性纳米粒 As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒 磁流体热疗 热化疗 As2O3 HeLa细胞 异体人宫颈癌移植瘤
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


目的①MnxZn1-xFe2O4磁性纳米粒的制备及表征;②As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒的制备及其特性检测;③As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒联合磁流体热疗对人宫颈癌Hela细胞作用的研究;④As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒联合磁流体热疗对异体人宫颈癌移植瘤作用的研究。方法①采用改良的化学共沉淀法制备MnxZn1-xFe2O4磁性纳米粒,透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM）、能谱仪（energy dispersive spectrometer, EDS）及X射线衍射（x-ray diffraction,XRD）、热分析系统进行表征,并在高频交变磁场（AMF）下检测Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁流体热效应情况;②采用浸渍法制备As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒,透射电镜、能谱仪、原子荧光分光光度计、原子吸收分光光度计等分析其特性;③分别将RPMI1640培养液、As2O3液、Mn0.5Zn0.5Fe2O4纳米粒、As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒在AMF下作用于宫颈癌HeLa细胞,MTT、流式细胞分析仪（FCM）检测并比较各组治疗效果;④采用宫颈癌瘤组织块建立移植瘤模型,将上述各组作用于移植瘤,Mn0.5Zn0.5Fe2O4纳米粒联合MFH组、As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒联合MFH组的荷瘤鼠在交变磁场下作用3次,每次间隔24小时,7w后颈椎脱臼处死裸鼠,剥离肿瘤,测并计算肿瘤质量抑制率及体积抑制率,同时通过HE切片组织学检查观察肿瘤组织、肿瘤周围组织及裸鼠各主要脏器的形态改变。⑤采用逆转录酶-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测HPV18E7与As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒联合磁流体热疗对宫颈癌作用的关系。结果①制备的MnxZn1-xFe2O4磁性纳米粒子呈棕褐色,平均直径30～40nm、近似球形,有良好的磁感应性;XRD显示制备的纳米粒的各X射线衍射谱图的特异峰线的高度和位置与JCPDS（粉末衍射标准联合会）数据库卡片中的Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁性纳米粒子结果一致;EDS证实制备的纳米材料含有Mn、Zn、Fe与O四种元素,无其它杂质;且其在高频交变磁场作用下具有明显的热效应,升温可至肿瘤热疗的有效温度范围（41℃～46℃）,并且可以恒温;②As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒近似球形,粒径在100nm左右。能谱仪证实其包含由锰、锌、铁、氧及砷,无其它成分,其含砷量为0.61%。③体外细胞实验:倒置显微镜观察发现As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒联合MFH能引起Hela细胞坏死及凋亡,MTT检测显示其能显著抑制HeLa细胞的增殖,流式细胞分析（FCM）检测显示其能诱导人宫颈癌HeLa细胞的凋亡,且其效果较单纯As2O3液及单纯MFH明显。而RPMI1640培养液及磁性纳米粒对细胞没有影响。④体内抑瘤实验:As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒联合MFH组肿瘤体积和质量抑制率分别为92.77%、90.01%,与对照组（CG）、磁性纳米粒组、单纯As2O3组和As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒组相比有明显差异（P<0.01）,且磁性纳米粒联合MFH组和As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒联合MFH组相比也有明显的差异（P<0.05）。两热疗组的肿瘤组织有明显坏死,而瘤旁及内脏组织均未见明显损伤。⑤RT-PCR显示:As2O3终浓度2μM的游离As2O3及As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒组,在循环参数30个条件下,HPV18-E7mRNA的表达明显受抑制,而单纯纳米Mn0.5Zn0.5Fe2O4处理组,联合或未联合MFH的情况下均不影响HPV18-E7mRNA的表达。结论①成功制备了Mn0.5Zn0.5Fe2O4磁性纳米粒及As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒;②As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒在高频交变磁场作用下可升温控温治疗宫颈癌;③As2O3/Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒可同时发挥As2O3的细胞毒性作用和磁感应加热的联合定向肿瘤热化疗的治疗作用,效果优于单一治疗,此为临床治疗宫颈癌提供新的方法。

全文目录


中文摘要  4-5
ABATRACT  5-7
缩略词表  7-11
前言  11-13
  1. 磁流体热疗的抗肿瘤作用  11
  2. As_2O_3的抗肿瘤作用  11-12
  3. 磁性药物载体热化疗的抗肿瘤作用  12-13
文献综述  13-16
  1. 磁控纳米载药系统  13
  2. 肿瘤热化疗  13-14
  3. 磁控纳米载药系统与肿瘤热化疗  14
  4. 总结与展望  14-16
第一章 材料与方法  16-24
  1.1 实验材料  16-18
    1.1.1 细胞株  16
    1.1.2 试剂  16-17
    1.1.3 主要仪器  17-18
    1.1.4 实验动物及人员  18
  1.2 实验方法  18-24
    1.2.1 Mn_(1-x)Zn_xFe_2O_4 (锰锌铁氧体)磁性纳米粒子的制备  18-19
    1.2.2 M_(1-x)Zn_xFe_2O_4 磁性纳米粒子的特性检测  19
    1.2.3 As_2O_3/Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒的制  19
    1.2.4 As_2O_3/Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒的特性检  19-20
    1.2.5 As_2O_3/Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒联合磁流体热疗对宫颈癌Hela 细胞治疗的体外实  20
    1.2.6 As_2O_3/Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒联合磁流体热疗对异体人宫颈癌移植瘤作用的研  20-21
    1.2.7 RT-PCR 方法检测HPV18-E7mRNA 的表达情况  21-23
    1.2.8 统计学分析  23-24
第二章 实验结果  24-28
  2.1 Mn_XZn_(1-x)Fe_2O_4（锰锌铁氧体）磁性纳米粒的制备及表征  24-25
    2.1.1 一般性状  24
    2.1.2 X 衍射  24
    2.1.3 透射电镜观察  24
    2.1.4 居里温度的测定  24
    2.1.5 Mn_XZn_(1-x)Fe_2O_4磁流体在交变磁场中的热效应  24-25
  2.2 As_2O_3/ Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒的制备及表征  25
    2.2.1 一般性状  25
    2.2.2 透射电镜观察  25
    2.2.3 As_2O_3/ Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒粒径统计学分  25
    2.2.4 能谱分析  25
    2.2.5 含砷量的测定  25
  2.3 As_2O_3/ Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒联合磁流体热疗对宫颈癌HELA 细胞作用的影响  25-26
    2.3.1 倒置显微镜下细胞形态改变  25-26
    2.3.2 MTT 比色法检测细胞增值率  26
    2.3.3 流式细胞仪（FCM）的测定  26
  2.4 As_2O_3/ Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒联合磁流体热疗对异体宫颈癌移植瘤作用的研究  26-27
    2.4.1 肿瘤质量抑制率  26-27
    2.4.2 肿瘤体积抑制率  27
    2.4.3 大体形态及病理组织学改变  27
  2.5 RT-PCR 法检测HPV18E7 的表达  27-28
第三章 讨论  28-33
  3.1 Mn_XZn_(1-x)Fe_2O_4磁性纳米粒的制备及表征  28-29
  3.2 As_2O_3/ Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒的制备及特性检测  29
  3.3 As_2O_3/ Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒联合磁流体热疗治疗宫颈癌及移植瘤的研究  29-31
  3.4 As_2O_3/ Mn_(0.5)Zn_(0.5)Fe_2O_4复合纳米粒联合磁流体热疗对宫颈癌的治疗与HPV18E7 的关系  31-32
  3.5 小结  32-33
研究小结  33-34
致谢  34-35
附图与照片  35-45
参考文献  45-50
作者简介  50
在校期间发表论文  50

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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