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口蹄疫O型、A型鸡胚化活疫苗毒株VP1基因的克隆与序列分析

作　者: 龚国华
导　师: 符子华；冉多良
学　校: 新疆农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 口蹄疫病毒鸡胚化弱毒疫苗株 VP1基因克隆序列分析
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)感染引起的偶蹄动物的高度接触性传染病,是世界上最重要的动物传染病之一,国际兽疫局(OIE)及我国都将该病列为A类家畜传染病之首。研究表明,VP1基因是FMDV的主要抗原决定簇,它具有极高的变异性。本论文是在FMDV弱毒疫苗株的基础上,选取了O型OE78、OE84、OR1、OR10和A型AE105、AE123、AR5、AR15各四个代次,通过分子生物学技术,对其VP1基因进行克隆和序列测定,利用DNAstar分析软件进行序列比较,观察O型、A型疫苗株种子毒不同代次的VP1基因和生产种子批不同代次的VP1基因序列变化,以了解其遗传变异规律,分析比较它与目前流行毒株VP1基因的差异,为进一步研究VP1基因在病毒中的变异规律和利用现有弱毒疫苗株生产灭活疫苗打下基础。与GenBank中的FMDV VP1基因序列进行比较的结果表明,8个毒株VP1基因的长度都为639bp;各型4个克隆毒株之间相互间差异不大,同源性O型在99.8%-100.0%,A型在98.6%-98.9%,但是O型鸡胚化弱毒株与其亲本牛源Akesu58和灭活苗毒种O-A-58基因核苷酸序列相差很大,同源性在80.8%-87.2%之间,氨基酸变异则要小得多,同源性在87.8%-93.0%;A型鸡胚化弱毒株与其亲本牛源XJ-KT-58的基因核苷酸序列差异较小,同源性在94.6%-94.9%之间。但是,由于鸡胚化弱毒株在565位核苷酸之后和571位核苷酸的插入与缺失,毒株之间的氨基酸同源性比核苷酸的要小,在92.3%-93.0%。O型FMDV鸡胚化弱毒株VP1蛋白在重要抗原位点141-160位氨基酸的变异较高,与新疆周边国家流行毒株相差2-3个氨基酸,与近年来流行的泛亚毒株相差3个氨基酸。但另一重要抗原位点200-213位氨基酸几乎没有变异,与新疆周边国家仅相差一个氨基酸,与近年流行的泛亚株完全相同。A型FMDV鸡胚化弱毒株VP1蛋白在重要抗原位点141-160位氨基酸的变异较高,与新疆周边国家和世界其它地方流行毒株相差4-7个氨基酸,但另一重要抗原位点200-213位氨基酸几乎没有变异,仅相差0-1个氨基酸。本研究是国内首次对FMDV鸡胚化弱毒疫苗株VP1基因进行克隆与序列分析,进一步丰富了我国FMDV毒株VP1基因库,为更加科学地防制FMD从分子水平提供依据。

全文目录

独创性声明  2
关于学位论文使用授权的说明  2-3
摘要  3-4
Abstract  4-8
符号、缩略语  8-9
第一部分文献综述  9-31
  第一章口蹄疫在世界的分布、流行与现状  9-14
    1.1 口蹄疫是世界流行性传染病  9-10
    1.2 口蹄疫在世界分布与流行的现状  10-14
  第二章口蹄疫病毒生物学特性  14-24
    2.1 口蹄疫病毒基因组结构及功能  14-16
    2.2 口蹄疫病毒的复制周期  16-18
    2.3 口蹄疫病毒的抗原结构  18-19
    2.4 口蹄疫病毒致病的分子机制  19-22
    2.5 口蹄疫病毒的遗传变异  22-24
  第三章口蹄疫病毒疫苗的研究  24-31
    3.1 灭活疫苗  24-25
    3.2 活疫苗  25-26
    3.3 合成肽疫苗  26
    3.4 活载体疫苗  26-27
    3.5 蛋白质载体疫苗  27
    3.6 基因植物可饲(食)疫苗  27-28
    3.7 基因工程亚单位疫苗  28-29
    3.8 基因缺失疫苗  29
    3.9 核酸（基因）疫苗  29-31
第二部分试验研究  31-71
  第四章口蹄疫 O 型鸡胚化活疫苗毒株 VP1 基因的克隆与序列分析  33-53
    4.1 材料  33-34
    4.2 方法  34-41
    4.3 结果  41-49
    4.4 讨论  49-53
  第五章口蹄疫 A 型鸡胚化活疫苗毒株 VP1 基因的克隆与序列分析  53-71
    5.1 材料  53-54
    5.2 方法  54-60
    5.3 结果  60-68
    5.4 讨论  68-71
结论  71-72
参考文献  72-77
附录  77-78
致谢  78-79
作者简介  79

口蹄疫O型、A型鸡胚化活疫苗毒株VP1基因的克隆与序列分析

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