学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

短短芽孢杆菌XDH的鉴定及其抗菌物质的分离、纯化与部分性质研究

作　者: 薛东红
导　师: 刘训理
学　校: 山东农业大学
专　业: 特种经济动物饲养
关键词: 短短芽孢杆菌 鉴定 抗菌物质 分离 纯化
分类号: Q93-33
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 276次
引　用: 6次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


a’311菌株是本实验室从泰山土壤分离获得的一株拮抗细菌。该菌株对多种动、植物病原细菌和真菌如:大肠杆菌、鸡巴氏杆菌、金黄葡萄球菌、黑胸败血病菌、棉花枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、茶轮斑病菌等有较强拮抗作用,该菌株抑菌谱广,菌株发酵性状优异,发酵液性质稳定,显示了诱人的开发前景。本文通过菌体形态特征观察、生理生化指标测定和16S rDNA序列分析,对该菌株进行了鉴定。选择了适合该菌株的发酵条件,并通过硫酸铵沉淀、Sephadex G-50柱层析、高效液相色谱(HPLC)和质谱(MS)分析,对抗菌物质进行了分离纯化,并研究了其部分性质。主要内容如下:1通过菌体形态特征观察、生理生化指标测定、16S rDNA序列及其系统进化树分析,鉴定a’311菌株为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),命名为短短芽孢杆菌XDH。该菌株的16S rDNA序列已在美国Genbank注册,登录号为DQ279738。2筛选到一个适合该菌株的发酵条件。培养基配方:葡萄糖16g,可溶性淀粉2.5g,蛋白胨10g,黄豆饼粉26g,玉米浆1.0g,NaCl7.5g,(NH4)2SO4 4.0g,蒸馏水1000mL。30℃,200rpm,装液量50mL/250mL,摇瓶振荡培养48h。3发酵液经40%饱和度硫酸铵盐析和Sephadex G-50柱层析,可将有效物质与其他组分进行粗分离。以乙腈-0.1%TFA水溶液和甲醇-0.4%乙酸水溶液为流动相,选择合适的HPLC条件,确定最佳HPLC条件为甲醇:0.4%乙酸(28:72,v/v),色谱柱Kromasil C18柱(250×4.6mm,5μm),流速1.0mL/min,柱温30℃,270nm检测。HPLC分析结果表明,得到至少A、B两个有效组分,其保留时间分别是6.225min和10.899min,这使得抗菌物质的分离纯化更进一步。质谱分析表明,A、B两组分的分子量分别是218和392。4抗菌物质粗品在水、甲醇、乙醇中溶解度较大,丙酮和乙醚中次之,在氯仿和苯中不溶解;茚三酮反应为阴性;耐高温;对酸敏感;对蛋白酶和紫外线照射不敏感;在270nm和220nm附近有最大紫外吸收。5该菌株抑菌谱广,对多种病原细菌和真菌有拮抗作用。其中,抗菌

全文目录


中文摘要  9-11
英文摘要  11-13
英文缩略表  13-14
1 前言  14-22
  1.1 细菌的分类鉴定  14-15
    1.1.1 16SrRNA 的概念  14-15
    1.1.2 16SrRNA 序列分析在细菌鉴定中的应用  15
  1.2 短芽孢杆菌及其产生的活性物质  15-18
    1.2.1 短芽孢杆菌属  15-16
    1.2.2 短芽孢杆菌产生的活性物质  16-18
      1.2.2.1 几丁质酶  16-17
      1.2.2.2 短杆菌肽  17-18
  1.3 色谱技术在物质分离纯化的应用  18-20
    1.3.1 凝胶色谱在物质分离纯化中的应用  18-19
    1.3.2 高效液相色谱（HPLC）在物质分离纯化中的应用  19-20
  1.4 质谱（MS）分析在物质结构鉴定中的应用  20-21
  1.5 本研究的目的意义  21-22
2 材料与方法  22-38
  2.1 材料  22-25
    2.1.1 供试菌株  22
    2.1.2 培养基  22
      2.1.2.1 固体培养基  22
      2.1.2.2 摇瓶发酵培养基  22
      2.1.2.3 发酵种子培养基  22
    2.1.3 病原菌  22-23
    2.1.4 引物  23
    2.1.5 主要软件  23
    2.1.6 主要药品试剂  23-24
    2.1.7 主要仪器  24-25
  2.2 方法  25-38
    2.2.1 a’311 菌体形态观察及生理生化指标测定  25-28
      2.2.1.1 菌落及菌体形态观察  25
      2.2.1.2 葡萄糖氧化发酵试验  25
      2.2.1.3 需氧性测定试验  25
      2.2.1.4 柠檬酸盐利用试验  25-26
      2.2.1.5 硝酸盐还原试验  26
      2.2.1.6 接触酶试验  26
      2.2.1.7 V-P 试验  26
      2.2.1.8 酪朊水解试验  26-27
      2.2.1.9 淀粉水解试验  27
      2.2.1.10 明胶液化试验  27
      2.2.1.11 酪氨酸水解试验  27
      2.2.1.12 M.R.试验  27
      2.2.1.13 糖醇类发酵试验  27-28
    2.2.2 a’311菌株16S rDNA序列分析  28-30
      2.2.2.1 DNA 提取  28
      2.2.2.2 16S rDNA片段扩增  28-29
      2.2.2.3 DNA 纯化  29
      2.2.2.4 质粒载体与目的DNA连接  29
      2.2.2.5 感受态细胞制备  29
      2.2.2.6 转化  29-30
      2.2.2.7 重组质粒鉴定  30
      2.2.2.8 测序  30
      2.2.2.9 16S rDNA序列分析  30
    2.2.3 a’311 菌株的发酵  30-32
      2.2.3.1 指示菌生长曲线测定  30-31
      2.2.3.2 发酵液效价测定  31-32
      2.2.3.3 发酵培养基选择  32
      2.2.3.4 发酵时间选择  32
    2.2.4 a’311 菌株抗菌物质的分离纯化  32-34
      2.2.4.1 硫酸铵盐析  32
      2.2.4.2 Sephadex G-100 柱层析  32-33
      2.2.4.3 Sephadex G-50 柱层析  33
      2.2.4.4 分析高效液相色谱  33
      2.2.4.5 制备高效液相色谱  33-34
    2.2.5 抗菌物质的性质研究  34-38
      2.2.5.1 溶解性  34
      2.2.5.2 紫外吸收  34
      2.2.5.3 茚三酮反应  34
      2.2.5.4 捷克八溶剂系统纸层析  34-35
      2.2.5.5 质谱分析  35
      2.2.5.6 蛋白酶对抗菌物质活性影响  35
      2.2.5.7 温度对抗菌物质活性影响  35-36
      2.2.5.8 pH 对抗菌物质活性影响  36
      2.2.5.9 紫外线对抗菌物质活性影响  36
      2.2.5.10 抑菌谱测定  36
      2.2.5.11 抗菌物质对病原细菌MIC和MBC的测定  36-38
3 结果与分析  38-64
  3.1 a’311菌株鉴定结果  38-42
    3.1.1 菌体形态及生理生化指标测定结果  38-40
    3.1.2 165 rDNA 序列及其系统进化树  40-42
  3.2 a’311 菌株发酵结果  42-46
    3.2.1 指示菌的生长曲线  42
    3.2.2 发酵液的效价测定标准曲线  42-44
    3.2.3 发酵培养基  44-45
    3.2.4 发酵时间  45-46
  3.3 a’311菌株抗菌物质的分离纯化结果  46-54
    3.3.1 硫酸铵盐析结果  46
    3.3.2 SephadexG-100 柱层析结果  46-47
    3.3.3 SephadexG-50 柱层析结果  47-48
    3.3.4 高效液相色谱（HPLC）分析结果  48-52
    3.3.5 高效液相色谱（HPLC）制备结果  52-54
  3.4 抗菌物质的性质研究结果  54-64
    3.4.1 溶解性  54-55
    3.4.2 紫外吸收  55
    3.4.3 茚三酮反应  55-56
    3.4.4 捷克八溶剂系统纸层析结果  56
    3.4.5 质谱分析结果  56-59
    3.4.6 蛋白酶对抗菌物质活性的影响  59
    3.4.7 温度对抗菌物质活性的影响  59-60
    3.4.8 pH 对抗菌物质活性的影响  60-61
    3.4.9 紫外照射对抗菌物质活性的影响  61-62
    3.4.10 抑菌谱  62
    3.4.11 抗菌物质对病原细菌MIC 和MBC  62-64
4 讨论  64-67
  4.1 关于a’311 菌株的鉴定  64
  4.2 关于a’311 菌株的发酵  64-65
  4.3 关于a’311 抗菌物的分离纯化  65
  4.4 关于a’311 抗菌物质的性质研究  65-66
  4.5 关于a’311 抗菌物质的结构解析  66
  4.6 关于a’311 抗菌物质的应用  66-67
5 结论  67-69
参考文献  69-78
附录  78-79
致谢  79-80
硕士期间发表的论文  80

相似论文

  1. 附面层抽吸对扩压叶栅气动性能影响的数值研究,TH453
  2. 缝隙式扩压叶栅流动机理研究,TK474.8
  3. 高温分离器布置对循环流化床锅炉炉内动力场影响的研究,TK229.66
  4. 苹果多酚对γ射线引起的免疫系统损伤防护作用研究,S661.1
  5. 分离镜系统的滑模变结构控制及抖振抑制,TP273
  6. 扩展青霉TS414脂肪酶在毕赤酵母的表达、纯化及其催化外消旋萘普生酯化拆分的研究,Q814
  7. 乙草胺降解株Y3B-1的分离、鉴定及降解特性研究,X172
  8. 米曲霉FS-1脂肪酶发酵优化、分离纯化与酶学特性的研究,TQ925.6
  9. 金花茶多糖的分离纯化及化学结构的研究,S567.19
  10. 一株溶藻细菌的分离鉴定及其对虾池两种蓝藻溶藻效果的研究,S942.91
  11. 翡翠贻贝糖胺聚糖降血脂作用的研究,R285.5
  12. 凡纳滨对虾虾头内源性蛋白酶分离纯化与酶学特性研究,S985.21
  13. 低分子量亨氏马尾藻岩藻聚糖硫酸酯的制备及抗肿瘤活性研究,TS254.9
  14. 罗非鱼分离蛋白的制备及其性质研究,TS254.4
  15. 芴甲氧羰基-D-色氨酸及D-苯丙氨酸分子印迹聚合物的制备及分离性能研究,O631.3
  16. 雪莲果低聚果糖提取分离及分析研究,TS255.1
  17. 抑制植物病原菌的植物提取物筛选,S482.2
  18. 玉米凝集素性质及其在PGPR筛选中的应用,S513
  19. 藏药三果汤散抗氧化有效成分研究,R29
  20. 沸石填料水洗法提纯沼气工艺实验研究,TQ221.11
  21. Pseudomonas sp.RT-1低温脂肪酶发酵条件优化、纯化及基因的克隆表达,TQ925

中图分类: > 生物科学 > 微生物学 > 微生物研究与微生物实验 > 微生物学技术与微生物学实验
© 2012 www.xueweilunwen.com