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三种马铃薯Y病毒属病毒的分子特性

作　者: 田延平
导　师: 李向东
学　校: 山东农业大学
专　业: 植物病理
关键词: 马铃薯Y病毒芜菁花叶病毒烟草脉带花叶病毒马铃薯Y病毒属衣壳蛋白 UTR 克隆序列分析
分类号: S435.32
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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引　用: 6次
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内容摘要

从河北、北京、山东泰安和潍坊等地的萝卜、大白菜、甘蓝、油菜上分离得到了8个芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus，TuMV)分离物，测定了它们3′末端cDNA片段的序列。根据衣壳蛋白基因(coat protein，CP)核苷酸序列可以将这8个分离物与本实验室得到的另外2个TuMV分离物分为3组：泰安旧镇大白菜(JZBC)、甘蓝(JZGL)和萝卜(JZLB)分离物为一组；北京萝卜(BJLB)、潍坊萝卜(WFLB)与引起萝卜红心病的TuMV分离物(WFLB99)为一组；泰安范镇、河北、潍坊(WFLB04)和泰安旧镇油菜(JZYC)的分离物为一组。与Genbank中其它分离物的衣壳蛋白基因核苷酸序列进行系统分析发现，本研究中的JZYC、FZLB、HBLB位于Basal-BR组，WFLB、BJLB位于Asian-BR组，JZLB、JZGL、JZBC位于World-B组。本研究首次发现中国有TuMV Basal-BR组分离物的存在。从山东、河南、安徽、云南、甘肃、黑龙江等省的主要烟区采集样品，利用RT-PCR技术克隆到了29个马铃薯Y病毒(Potato virus Y，PVY)分离物3′-末端部分基因组，测定了其核苷酸序列，同时测定了其中25个分离物HC-Pro基因的核苷酸序列。与Genbank中85个PVY分离物CP基因核苷酸序列分析发现，这些分离物可以分为O、N及C三个组，在N组中还包括一个小的亚组NTN；O组中包括N：O亚组。本研究中山东TX91、AQ1、MY60、F8，河南HN8，安徽A33等6个分离物位于N组中，其中TX91及AQ1位于NTN亚组；黑龙江H20、H18、H11，山东F4、MY55、MY59、Q23、ZC37、ZB3、ZB1、ZC39，安徽A26、A2、A5，河南HN6、HN10、HN43，甘肃G5、G14、G10、G1、G8、G15等23个分离物位于O组。根据69个HC-Pro基因的核苷酸序列分析表明可以分为两个组，山东MY55、F8，河南HN10，安徽A5、A33等位于一个组，山东AQ1、TX91、ZC37、ZC39、MY60、MY59、ZB1、ZB3，河南HN6、HN43、

全文目录

中文摘要  10-12
Abstract  12-14
第一部分引言  14-23
  1.1 马铃薯Y病毒属病毒的一般特性  14
  1.2 马铃薯Y病毒属病毒的分子生物学特性  14-15
  1.3 病毒的系统侵染  15-16
  1.4 基因组复制  16-17
  1.5 病毒移动  17-18
  1.6 病毒的传播  18-19
    1.6.1 蚜虫传播  18
    1.6.2 种子传播  18-19
  1.7 病害症状形成  19-20
  1.8 马铃薯Y病毒属分类标准的确立  20-23
第二部分芜菁花叶病毒不同分离物3’-cDNA片段的克隆及序列分析  23-40
  2.1 材料和方法  25-32
    2.1.1 实验材料  25
    2.1.2 病毒RNA的提取  25-26
    2.1.3 反转录-聚合酶链式反应  26-27
    2.1.4 目的片段回收  27
    2.1.5 外源片段的连接  27-28
    2.1.6 感受态细胞的制备  28
    2.1.7 转化DH5α感受态细胞  28-29
    2.1.8 质粒DNA的提取  29-31
    2.1.9 鉴定重组子  31-32
    2.1.10 序列测定及分析  32
  2.2 结果与分析  32-39
    2.2.1 不同TuMV分离物的RT-PCR结果  32
    2.2.2 重组质粒的电泳鉴定  32-33
    2.2.3 重组质粒的酶切电泳  33
    2.3.4 重组质粒PCR鉴定  33
    2.3.5 8个TuMV分离物的核苷酸序列鉴定  33
    2.3.6 衣壳蛋白及3’-UTR序列分析  33-39
  2.3 讨论  39-40
第三部分中国烟草上马铃薯Y病毒的分子变异  40-63
  3.1 马铃薯Y病毒的分类现状  40-42
  3.2 材料和方法  42-50
    3.2.1 实验材料  42
    3.2.2 病毒标本RNA的提取  42-43
    3.2.3 引物设计  43
    3.2.4 反转录-聚合酶链式反应  43-45
    3.2.5 回收目的片段DNA  45-46
    3.2.6 目的片段的连接  46-47
    3.2.7 转化感受态细胞DH5α及蓝白斑筛选  47
    3.2.8 菌落PCR  47-48
    3.2.9 质粒DNA的小量提取  48
    3.2.10 限制性酶切反应  48-49
    3.2.11 测序  49-50
    3.2.12 序列拼接及系统分析  50
  3.3 结果  50-57
    3.3.1 RT-PCR结果  50
    3.3.2 目的片段的回收结果  50
    3.3.3 菌落PCR结果  50
    3.3.4 质粒DNA的提取电泳结果  50-51
    3.3.5 酶切结果  51-53
    3.3.6 序列测定及分析  53-57
  3.4 讨论  57-63
第四部分烟草脉带花叶病毒3’末端基因组的克隆及序列分析  63-77
  4.1 材料和方法  64-66
    4.1.1 实验材料  64
    4.1.2 病毒RNA的提取  64
    4.1.3 引物设计  64
    4.1.4 反转录  64
    4.1.5 聚合酶链式反应  64-65
    4.1.6 回收目的片段DNA  65
    4.1.7 目的片段的连接  65
    4.1.8 转化大肠杆菌DH5α及蓝白斑筛选  65
    4.1.9 菌落PCR  65
    4.1.10 质粒DNA的小量提取  65
    4.1.11 测序  65
    4.1.12 序列拼接及分析  65-66
  4.2 结果  66-76
    4.2.1 RT-PCR结果  66
    4.2.2 目的片段回收结果  66
    4.2.3 菌落PCR鉴定结果  66
    4.2.4 质粒DNA的电泳鉴定  66
    4.2.5 测序及序列分析  66-76
  4.3 讨论  76-77
结论  77-78
参考文献  78-93
附录一  93-105
硕士期间发表的学术论文  105-106
致谢  106

三种马铃薯Y病毒属病毒的分子特性

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