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幽门螺杆菌CagA蛋白与微囊藻毒素对胃肠道上皮细胞作用的蛋白质组学研究

作　者: 葛振
导　师: 郑树
学　校: 浙江大学
专　业: 生物信息学
关键词: 蛋白质表达蛋白质组学磷酸化位点宿主细胞上皮细胞胃肠道细胞蛋白质酪氨酸突变型野生型
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

研究背景流行病学资料表明,幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associated protein A,CagA)与慢性活动性胃炎、消化性溃疡和胃癌的发生密切相关。CagA蛋白由Hp疾病相关基因“cag致病岛”编码并通过特有的Ⅳ型分泌途径进入宿主细胞,其C端谷氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-酪氨酸-丙氨酸(EPIYA)基序中酪氨酸位点的磷酸化对其生物学功能的发挥至关重要。以往的研究已发现,磷酸化的CagA通过与SHP-2结合,强烈干扰宿主细胞信号转导通路,激活转录因子NF-κ B和AP-1,激活原癌基因c-fos和c-jun,导致细胞的增殖与分化。CagA与SHP-2的相互作用还会导致宿主肌动蛋白细胞骨架重构,使细胞的运动性和迁移能力增强。然而,CagA的致病机制至今仍不完全明确。从蛋白质组角度整体性地研究CagA对宿主细胞的影响,将有助于对其致病机制的全面认识。表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(surface-enhanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra,SELDI-TOF-MS)技术可用于建立细胞特异的蛋白质表达谱,分析不同生理或病理状态下蛋白质组的差异。相对于双向电泳等传统技术,SELDI技术具有操作简单上样量少,高通量、高灵敏度、在低分子量范围具有更好的分辨能力等优势,是分析细胞蛋白质组的有力工具,已在肿瘤标志物的筛选和肿瘤的早期检测中发挥了重要作用,在疾病机理研究领域也具有很好的应用前景。本研究采用SELDI技术研究CagA对胃上皮AGS细胞蛋白质表达的影响,从而确定与CagA致病过程有关的小分子宿主细胞蛋白质,并分析蛋白质表达差异与CagA磷酸化的相关性以及与CagA激活Erk/MAPK信号转导通路的相关性。方法为研究CagA对AGS细胞蛋白质表达的影响,我们用野生型cagA质粒、磷酸化位点突变型cagA质粒和空载体质粒瞬时转染AGS细胞,EGFP质粒作为监控转染效率的对照。RT-PCR和测序验证野生型及突变型cagA基因在对应组中的表达。用SELDI蛋白质芯片系统分别对各组细胞蛋白进行结合与分析,得到各组特异的

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缩略语说明  5-6
第一部分：幽门螺杆菌CagA蛋白对胃上皮AGS细胞作用的蛋白质组学研究  6-43
  中文摘要  6-9
  英文摘要  9-12
  前言  12-14
  材料与方法  14-20
  结果  20-34
  讨论  34-38
  参考文献  38-43
第二部分：微囊藻毒素致大肠干(crypt)细胞转化的蛋白质组学研究  43-63
  中文摘要  43-45
  英文摘要  45-47
  前言  47-49
  材料与方法  49-53
  结果  53-58
  讨论  58-61
  参考文献  61-63
综述  63-76
附录(硕士在读期间发表的论文)  76-77
致谢  77

幽门螺杆菌CagA蛋白与微囊藻毒素对胃肠道上皮细胞作用的蛋白质组学研究

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