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乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液蛋白质组学的研究分析

作　者: 金蕾
导　师: 赵久阳
学　校: 大连医科大学
专　业: 内科学
关键词: 蛋白质组学乙型肝炎病毒相关性肾炎尿蛋白生物标志物
分类号: R692.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）患者的尿液蛋白质谱特点,并与原发性膜性肾病、慢性乙型肝炎患者的尿液蛋白质谱进行比较,筛选出乙型肝炎病毒相关性肾炎患者尿液的差异性表达蛋白质,探讨质谱技术在HBV-GN早期无创诊断方面的临床应用价值。方法:留取乙型肝炎病毒相关性肾炎（病理类型为膜性肾病）患者（n=7）、原发性膜性肾病患者（n=8）及慢性乙型肝炎无肾脏损害患者（n=7）的空腹状态下清洁中段晨尿标本,为避免细菌生长和蛋白酶解,于1小时内放置于-80℃冰箱保存备用;将此22份标本溶解完全后,用直径为0.22μm的微孔超滤膜过滤去除细胞碎片等较大的杂质,再用-20℃预冷丙酮按照标本体积与丙酮体积比为4:1的比例迅速加入进行蛋白沉淀,置于-20℃过夜后,经4℃4000×g离心30分钟,弃上清液,留取含尿蛋白的沉淀物,真空干燥浓缩;浓缩干燥的蛋白沉淀物用PBS（磷酸盐缓冲液）充分溶解后应用Bradford（考马斯亮蓝染色）法测定蛋白浓度;根据测定的标本蛋白浓度称取每例样品含0.5mg蛋白质的混合固体,充分酶解后行HPLC除盐,测得肽峰,获取含肽混合液,真空干燥浓缩;再行HPLC-ESI-MS/MS分析;将获得的尿液蛋白质多肽序列结果在MASCOT软件行数据库检索,所用的库为ipi.human,v3.05,将获得的蛋白序列号在Uniprot数据库中进行检索,查询所表达的蛋白质的名称、作用及细胞学定位等相关信息。结果:经过手工验证,7例乙型肝炎病毒相关性肾炎患者尿液标本中共鉴定出622种蛋白质,所有7份标本共同表达了11种蛋白质;8例原发性膜性肾病患者尿液标本中共鉴定出520种蛋白质,所有8份标本共同表达了9种蛋白质;7例慢性乙型肝炎无肾脏损害患者尿液标本中共鉴定出730种蛋白质,所有7份标本共同表达了10种蛋白质。3组分别进行组间比较,乙型肝炎病毒相关性肾炎患者的尿液蛋白质中检测出5种具有差异性表达的蛋白质,经鉴定分别是:α-1B糖蛋白、血浆铜蓝蛋白、α1-抗胰凝乳蛋白酶、Igλ2链C区、未命名蛋白（B3KS79）;原发性膜性肾病患者的尿液蛋白质中检测出4种具有差异性表达的蛋白质,经鉴定分别是:转铁蛋白、α₁-抗胰蛋白酶、Igλ链C区、维生素D结合蛋白;本实验在慢性乙型肝炎患者尿液中未检测到差异性表达蛋白。结论:HPLC-ESI-MS/MS技术是一种快速、简便易行和高通量的研究方法,在蛋白质分离、鉴定过程中具备独特的优越性;血浆铜蓝蛋白、α-1B糖蛋白、α1-抗胰凝乳蛋白酶、Igλ2链C区和一种未命名蛋白在乙型肝炎病毒相关性肾炎患者尿液中有差异性表达,有可能成为乙型肝炎病毒相关性肾炎的生物标志物。

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摘要 6-8Abstract 8-10前言 10-11材料与方法 11-16结果 16-26讨论 26-31结论 31-32参考文献 32-35综述 35-46 参考文献 42-46致谢 46

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