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二氮嗪后处理在大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究

作　者: 任思宏
导　师: 刘兴奎；喻田
学　校: 遵义医学院
专　业: 麻醉学
关键词: 心肌二氮嗪后处理线粒体蛋白质组学双向差异凝胶电泳
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察二氮嗪后处理对缺血再灌注损伤大鼠心脏功能的影响,以及二氮嗪后处理对线粒体内蛋白质表达的影响。方法：建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型。将24只雄性SD大鼠随机分为空白组(Nor)、缺血再灌注损伤组(Con)、二氮嗪后处理组(DZ)、5-羟葵酸拮抗二氮嗪后处理组(5HD-DZ),每组6只。各组灌注方案：Nor组：持续灌注K-H液120 min,无缺血再灌注损伤。Con组、DZ组、5HD-DZ组缺血前先灌注Kerbs-Henseleit缓冲液(K-H液)平衡20 min,灌注4℃ST.Thomas停跳液,使全心缺血40 min后,此三组按以下方案灌注：①Con组：灌注K-H液60 min;②DZ组：灌注K-H液前给予50μmol/L二氮嗪5 min,继之K-H液55 min;③5HD-DZ组：序贯灌注100μmol/L 5-羟葵酸5 min、50μmol/L二氮嗪5 min、K-H液50 min。观察各组平衡末及灌注末心功能,于灌注末取左心室组织,采用差速离心法和Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠心肌线粒体。采用2D-DIGE和MALDI-TOF-MS技术,检测鉴定各组心肌线粒体的蛋白质表达情况,蛋白表达的差异在1.5倍以上者为有意义。结果：(1)利用Nycodenz密度梯度离心法提纯的线粒体纯度高；(2)再灌注前给予二氮嗪处理(DZ组)的缺血心脏,心功能明显好于Con组和5HD-DZ组(P<0.05),Nor组心功能优于DZ组(P<0.05)；(3)经2D-DIGE和MALDI-TOF-MS鉴定,与Nor组比较,Con组、DZ组、5HD-DZ组丙酮酸脱氢酶E1α亚基(PDHA1)、短链/支链脂酰辅酶A脱氢酶(ACADSB)、NADH脱氢酶I10。亚基(NDUFA10)和rCG55630四个蛋白在缺血再灌注末的表达量增加；(4)再灌注末,DZ组NDUFA10和rCG55630的升高程度低于Con组和5HD-DZ组；再灌注末,PDHA1和ACADSB在Con组、DZ组和5HD-DZ组中的表达无明显差异。结论：(1) PDHA1、ACADSB、NDUFA10和rCG55630在缺血/再灌注早期表达上调；(2)二氮嗪后处理可抑制心肌缺血/再灌注早期NDUFA10和rCG55630表达的增加;(3)二氮嗪后处理能够减轻心肌缺血/再灌注损伤,有保护心肌、改善心功能的作用；(4)用不连续密度梯度离心法可提取到高纯度的线粒体。

全文目录

英汉缩略词对照表  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
1. 材料  12-15
2. 方法  15-33
  2.1 心肌线粒体的分离、纯化  15-20
  2.2 Langendorff离体心脏灌注模型  20-22
  2.3 双向差异凝胶电泳  22-33
3. 结果  33-43
  3.1 线粒体纯度验证  33-34
  3.2 心功能比较  34-35
  3.3 2D-DIGE、图谱分析和质谱鉴定  35-43
4. 讨论  43-47
5. 结论  47-48
参考文献  48-53
综述:线粒体蛋白质组学研究进展  53-62
  参考文献  59-62
致谢  62-63
作者简介  63

二氮嗪后处理在大鼠心肌线粒体比较蛋白质组学的研究

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