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11β-羟基类固醇脱氢酶1在糖尿病血管病变中作用的研究

作　者: 付伟
导　师: 缪珩
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科学
关键词: 11β-羟基类固醇脱氢酶高糖猪髂动脉内皮细胞分裂素活化的蛋白激酶糖皮质激素
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

【摘要】目的探讨高糖状态下血管内皮细胞11β-羟基类固醇脱氢酶-1(11β-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type -1,11β- HSD1)活性的变化,以及抑制11β-HSD1对磷酸化P38MAPK和ERK1/2蛋白表达及细胞活力的影响。方法(1)在体外培养猪髂动脉内皮细胞(pig iliac artery endothelial cells,PIECs),在不同浓度的葡萄糖中分别加入和不加酶底物可的松及酶抑制剂甘草次酸,刺激细胞24h,高效液相色谱法检测可的松的转化率来反映酶的活性;用MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪PI法检测细胞的凋亡。(2)体外培养PIECs,分别在不同时间和用不同浓度的葡萄糖刺激培养PIECs,提取细胞总蛋白;另外用含正常浓度葡萄糖(5.6mmol/L)和高浓度葡萄糖(33mmol/L)的培养基培养细胞,以培养基中加入11β-HSD1抑制剂甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)为实验组,设未加入GA为对照组,提取细胞总蛋白, Western blot检测P-P38MAPK和P-ERK1/2蛋白表达变化。采用台盼蓝染色法,检测细胞死亡率的变化。结果(1)与酶底物共同孵育,11β-HSD1的活性增加,与葡萄糖浓度成正相关(P<0.05);在酶活性增加的培养皿中,细胞的生长受到明显抑制,细胞凋亡数增加(P<0.05),而酶抑制剂可改善这一现象。(2)高糖能增加ERK1/2、P38MAPK的磷酸化,其中P-P38MAPK呈时间和葡萄糖浓度依赖性增加,甘草次酸可部分减少高糖培养下P-P38MAPK的表达;而P-ERK1/2蛋白表达有葡萄糖浓度依赖趋势,磷酸化程度在24h时达到高峰,甘草次酸不影响P-ERK1/2的表达;甘草次酸可提高高糖培养下细胞的生存率。结论高糖呈浓度依赖性的增加11β-HSD1的活性,糖皮质激素局部效应加强,使内皮细胞增殖受到抑制,凋亡率增加。采用11β-HSD1的抑制剂可提高血管内皮细胞的生存率,这一作用可能由P38MAPK通路介导。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
引言  7-11
  参考文献  9-11
第一部分高糖作用下11β-羟基类固醇脱氢酶活性的变化及对血管内皮细胞的影响  11-27
  中文摘要  11
  英文摘要  11-12
  前言  12
  材料与方法  12-16
  结果  16-22
  讨论  22-24
  参考文献  24-27
第二部分 11β-羟基类固醇脱氢酶可通过MAPKs 通路作用于血管内皮细胞  27-45
  中文摘要  27
  英文摘要  27-28
  前言  28-29
  材料与方法  29-35
  结果  35-41
  讨论  41-43
  参考文献  43-45
结论及展望  45-46
综述  46-54
  参考文献  50-54
发表文章  54-57
致谢  57

11β-羟基类固醇脱氢酶1在糖尿病血管病变中作用的研究

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