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乳腺癌中Hsp27功能研究

作　者: 谷明波
导　师: 赵辅昆
学　校: 浙江理工大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: Hsp27 乳腺癌 双向凝胶电泳 质谱
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


乳腺癌发病率高、危害性大。有研究表明,Hsp27可能参与乳腺癌发生、增殖、转移与凋亡等生理过程。患者对治疗药物产生抗性也可能与其体内Hsp27高表达有关。本实验通过构建Hsp27差异表达细胞株,筛选出受Hsp27表达量变化影响的蛋白质。根据得到的蛋白质信息,力图侧面阐明Hsp27在乳腺癌发生、发展过程中扮演的角色。MDA-MB-231 Hsp27高表达细胞株与MDA-MB-361 Hsp27高表达细胞株,与相应的MDA-MB-231空载体细胞株和MDA-MB-361空载体细胞株相比,Hsp27表达量均明显提高。双向电泳分析结果显示MDA-MB-231 Hsp27差异表达细胞株中有26个蛋白表达量变化,通过MALDI-TOF-TOF质谱分析,鉴定出其中6个差异点;而MDA-MB-361 Hsp27差异表达细胞株中筛选得到4个差异蛋白点,质谱鉴定得到2个蛋白的详细信息。鉴定得到的蛋白包括hUCRP、CDK1、MMP-1、Hsp27、CAP-G、未知蛋白C8orf59、Cep27和MUSKELIN。其中MMP-1是基质金属蛋白酶,能够降解细胞间质胶原蛋白,已被证明与包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤的转移有关;CAP-G是肌动蛋白调节蛋白,介导微丝等细胞骨架结构合成,调节有丝分裂过程,与乳腺癌增殖有关。实验结果表明,Hsp27可能是通过某种信号途径增加MMP-1表达量,以增强乳腺癌转移和浸润能力。同时,CAP-G因受到Hsp27高表达影响,表达受到抑制,或者通过某种渠道被降解,理论上应能减小乳腺癌危害性,具体情况如何,尚有待于进一步研究。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
缩略表  8-9
第一章 绪论  9-16
  1 乳腺癌概述  9
    1.1 乳腺癌疾病  9
    1.2 乳腺癌的发生  9
  2 热休克蛋白和HSP27  9-11
    2.1 热休克蛋白概述  9-10
    2.2 Hsp27  10-11
    2.3 Hsp27 与乳腺癌的关系  11
  3 蛋白质组学概述  11-14
    3.1 蛋白质组学的提出  11-12
    3.2 蛋白质组学研究方法  12-14
      3.2.1 蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)  12-13
      3.2.2 质谱技术(MS)  13-14
      3.2.3 生物信息学与蛋白质组学研究  14
    3.3 蛋白质组学发展展望  14
  4 本课题研究目的和意义  14-16
第二章 HSP27 高表达与低表达MDA-MB-231 乳腺癌细胞的比较蛋白质组学研究  16-29
  1 前言  16
  2 主要试剂和仪器  16-18
    2.1 主要试剂  16-17
    2.2 主要仪器  17
    2.3 分析软件  17
    2.4 主要溶液配制  17-18
  3 实验方法  18-23
    3.1 免疫印迹(Western Blot)  18-19
      3.1.1 样品制备  18-19
      3.1.2 免疫印迹实验  19
    3.2 双向凝胶电泳  19-21
      3.2.1 细胞样品制备  19-20
      3.2.2 第一向等电聚焦(IEF)  20
      3.2.3 IPG 胶条的平衡  20-21
      3.2.4 IPG 胶条的转移及SDS-PAGE  21
    3.3 银染及图像分析  21
    3.4 胶内酶解  21-22
    3.5 点靶  22
    3.6 MALDI-TOF/TOF 质谱鉴定和数据库搜索  22-23
  4 结果  23-26
    4.1 显微镜观察结果  23
    4.2 MDA-MB-231 Hsp27 高表达细胞株验证  23-24
    4.3 MDA-MB-231 Hsp27 差异表达细胞株差异蛋白质组学比较  24-25
      4.3.1 双向电泳结果  24
      4.3.2 蛋白质差异分析  24-25
    4.4 质谱鉴定结果  25-26
  5 讨论  26-29
第三章 HSP27 高表达与低表达MDA-MB-361 乳腺癌细胞的比较蛋白质组学研究  29-33
  1 前言  29
  2 主要试剂和仪器  29
  3 实验方法  29
  4 实验结果  29-32
    4.1 显微镜观察结果  29-30
    4.2 MDA-MB-361 Hsp27 高表达细胞株验证  30
    4.3 MDA-MB-361 Hsp27 高表达细胞株蛋白质组差异比较  30-32
      4.3.1 双向电泳结果  30-31
      4.3.2 蛋白质差异分析  31-32
    4.4 质谱鉴定结果  32
  5 讨论  32-33
第四章 结论与展望  33-34
参考文献  34-38
致谢  38-39
已发表论文情况  39

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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