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增殖性玻璃体视网膜病变患者玻璃体蛋白质组研究

作　者: 张雯
导　师: 张学东
学　校: 重庆医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 增殖性玻璃体视网膜病变玻璃体双向凝胶电泳质谱蛋白质组
分类号: R776.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的:(1)建立和优化玻璃体(vitreous humor, VH)双向凝胶电泳-质谱技术。(2)利用双向凝胶电泳(2-DE)技术对增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)眼与健康捐献眼(对照组)的VH蛋白质表达谱进行比较,寻找PVR的VH差异蛋白质。(3)结合肽质量指纹谱技术(PMFs)对差异蛋白点进行鉴定和数据搜索。阐明差异蛋白与PVR的关系,寻找PVR的疾病特异性蛋白(DSPs),为PVR的诊断和药物治疗提供新的方法。方法:(1)通过玻璃体切割手术收集未经稀释的PVR患者VH为实验组,健康捐献眼VH为对照组。(2)提取实验组和对照组VH总蛋白。(3)分别以冷丙酮沉淀、TCA/丙酮沉淀法提纯浓缩VH蛋白质,以固相pH梯度-等电聚焦(IPG-IEF)为第一向、SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向凝胶电泳(2-DE)对VH蛋白进行二维分离,并对标本处理、2-DE方法进行优化。(4)采集凝胶图像,以PDQuest软件进行图像分析,寻找有意义的差异蛋白点。(5)将差异蛋白质点取出、酶解,进行质谱(MS)鉴定,得到肽质量指纹谱(PMF),采用Mascot和MS-fit软件进行国际互联网数据检索,找到差异蛋白。结果:(1)对比两种样品提纯浓缩方法,发现对初步提取出的VH蛋白质进行冷丙酮沉淀可得到满意的电泳样品浓度和纯度。(2)比较不同pH范围的电泳分离效果,发现VH蛋白集中在pH4-7范围,使用pH7-4的IPG胶条进行一向分离效果更好。(3)比较不同上样量获得的2-DE图谱,认为上样量300μg对最后进行银染的17cmIPG胶条最合适,得到分辨率较高的2-DE图谱。(4)经过优化电泳条件获得了重复性较好的2-DE图谱,对实验组和对照组2-DE图谱进行分析得到12个差异蛋白点。实验组高表达9个,低表达3个。(5)对差异蛋白进行质谱鉴定,鉴定出4个可能与PVR相关的差异蛋白质,分别为鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(Guanine nucleotide-binding protein G,G protein)、分拣连接蛋白11(Sorting nexin 11, SNX11)、类光传感因子蛋白(Phosducin-like protein, PHLP)、S100-A7蛋白。其中G蛋白及S100A7在实验组表达上调,SNX11及PHLP在实验组表达下调。结论:(1)本研究确立了稳定的临床玻璃体标本采集方法,成功建立和优化了VH蛋白质的2-DE/MS技术。(2)实验组与对照组VH的蛋白质表达有明显差异,4种蛋白质在PVR玻璃体中高表达或低表达,分别为G蛋白、S100A7蛋白、分拣连接蛋白11、类光传感因子蛋白。(3)得到的4种蛋白质在功能上均与细胞增殖分化密切相关,推测可能在PVR形成过程中对多种PVR细胞尤其是RPE细胞的异常增殖和分化起一定作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-13
1 材料和方法  13-29
2 结果  29-38
3 讨论  38-48
结论  48-49
参考文献  49-55
文献综述  55-65
  参考文献  62-65
致谢  65-66
攻读硕士学位期间发表的文章  66

增殖性玻璃体视网膜病变患者玻璃体蛋白质组研究

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