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潍坊地区鸭传染性浆膜炎病原体的分离鉴定与疫苗制备应用研究

作　者: 都振玉
导　师: 牛钟相
学　校: 山东农业大学
专　业: 兽医
关键词: 鸭传染性浆膜炎里默氏杆菌分离鉴定致病性灭活苗免疫保护
分类号: S858.32
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的一种接触性、急性或慢性、败血性传染病,曾被命名为鸭疫巴氏杆菌病(Pasteurella anatipestifer infection)。主要感染1-8周龄雏鸭,其中以2-3周龄鸭最易感,死亡率差别较大,是当前危害养鸭业的重要传染病之一。为了探明潍坊地区鸭疫里默氏杆菌的主要生物学特性及防制方法,开展了本项研究,分三部分研究内容。试验一鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定从潍坊地区发生的典型鸭传染性浆膜炎病料中分离到了4株革兰阴性小杆菌,经过生化试验、PCR等方法鉴定为鸭疫里默氏杆菌(RA),将其分别命名为SG1、HT2、WC3、SG4。然后对4株菌的致病性、药物敏感性及血清型进行了进一步鉴定,结果显示,4株菌对雏鸭都有很强的致病性;多数菌株对庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、呋喃妥因、菌必治、头孢噻肟有较高的敏感性;WC3株为血清1型, SG1、HT2、SG4为血清3型。试验二鸭疫里氏杆菌对雏鸭致病性研究采用WC3株RA制备成含菌量约为3×10~9CFU/ml的菌悬液,对10日龄雏鸭脚蹼注射接种病原菌,通过观察临床症状和病理变化、检测感染鸭免疫器官和组织学等变化,探索鸭疫里氏杆菌对鸭的致病性,结果显示:感染鸭出现与自然发病鸭相似的临床症状,剖检观察无典型病变,有的气囊略浑浊,轻度心包积液,脑血管扩张呈树枝状,但因病程较短各脏器均无明显的纤维素性渗出。各组鸭免疫器官的变化明显,感染鸭的脾脏(1、2组每只平均重分别为1.1g、1.2g)略有肿胀(对照组平均重1.0g),并呈斑驳状;胸腺肿大明显(1、2组每只平均重分别为1.2g、1.3g,对照组0.98g),并有出血;法氏囊呈现明显的萎缩现象(1、2试验组每只平均重分别为0.8g、0.75g,对照组为1.1g)。脾脏和法氏囊的病理组织学损伤严重,淋巴细胞均明显减少;胸腺病理组织学变化不显著。试验三鸭疫里默氏杆菌灭活苗的研制及其免疫效果研究取WC3(1型)、SG4株(3型)RA株分别培养,经纯检合格(≥10~9/ml)甲醛灭活,加2%吐温-80制成水相后,与94%的白油、6%的司本80、2%硬脂酸铝混合制成油相,然后按1:2的比例分别制成油乳剂灭活单苗,并进行疫苗的无菌检验、安全性检验、稳定性检验、免疫保护试验。结果显示:两种油乳剂灭活苗在TSA平板、血平板上均无细菌、霉菌生长;在3000 r/min离心15 min,未发生分层现象;按5倍量分别接种雏鸭进行毒性试验结果显示,被接种鸭无不良临床症状,接种部位也均无异常变化;免疫雏鸭后21d攻毒结果发现,两种疫苗的的保护率均可达到90%-100%,且不同血清型之间没有交叉保护作用。

全文目录

中文摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
鸭疫里默氏杆菌病的研究进展  11-23
  1 病原生物学特性  12-14
    1.1 RA 的分类地位  12
    1.2 RA 的形态结构  12
    1.3 RA 的培养特性  12-13
    1.4 RA 的理化特性  13
    1.5 RA 的血清型  13-14
  2 流行病学和病理生物学  14-17
    2.2 临床症状  15-16
    2.3 病理变化  16-17
  3 诊断方法  17-18
    3.1 病原菌的分离与鉴定  17
    3.2 实验室诊断  17-18
    3.3 鉴别诊断  18
  4 防制措施  18-22
    4.1 综合防治措施  18-19
    4.2 药物防治  19
    4.3 疫苗免疫  19-22
  5 问题与展望  22
  6 本研究的目的意义  22-23
试验一鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定  23-35
  1 材料与方法  23-25
    1.1 材料  23-24
    1.2 方法  24-25
  2 结果与分析  25-33
    2.1 病料中RA 的形态特征  25
    2.2 细菌的培养特性  25-27
    2.3 细菌的涂片染色  27
    2.4 生化试验  27-28
    2.5 致病性试验  28-31
    2.6 PCR 鉴定  31-32
    2.7 血清型鉴定  32
    2.8 药敏试验  32-33
  3 讨论  33-34
    3.1 分离培养  33
    3.2. 血清型  33
    3.3 耐药性  33-34
  4 小结  34-35
试验二鸭疫里氏杆菌对雏鸭致病性研究  35-42
  1 材料与方法  35-37
    1.1 材料  35-36
    1.2 方法  36-37
  2 结果与分析  37-41
    2.1 病原分离鉴定  37-38
    2.2 临床症状  38-39
    2.3 剖检变化  39
    2.4 RA 感染后免疫器官的病理组织学变化  39-41
  3 讨论  41
  4 小结  41-42
试验三鸭疫里氏杆菌灭活苗的研制及其免疫效果研究  42-47
  1 材料与方法  42-44
    1.1 材料  42-43
    1.2 方法  43-44
  2 结果与分析  44-45
    2.1 疫苗质量检测结果  44
    2.2 免疫保护结果  44-45
  3 讨论  45-46
  4 小结  46-47
结论  47-48
参考文献  48-53
致谢  53

潍坊地区鸭传染性浆膜炎病原体的分离鉴定与疫苗制备应用研究

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