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浙东沿海地区对虾白斑综合症病毒分子流行病学研究

作　者: 余晓巍
导　师: 倪穗
学　校: 宁波大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 对虾白斑综合症病毒(WSSV) 分子流行病学 ORF23/24 ORF14/15 ORF94
分类号: S945
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV),桃拉综合症病毒(Taura syndrome virus,TSV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)是引起对虾疾病的三种主要的水生动物病毒病原,导致对虾传染性疾病爆发,造成对虾养殖业严重的经济损失。2008年在我国浙江省东沿海岸线共12个对虾养殖基地进行对虾样品的收集,应用PCR和RT-PCR检测技术对收集的虾样感染WSSV,IHHNV及TSV情况进行初步调查,结果显示,所有养殖场的对虾均检测到了WSSV或IHHNV,其6个养殖场检测到了WSSV和IHHNV在同一宿主体内共感染,其中4个养殖场共感染比例较高,2个养殖场存在WSSV单独感染,4个养殖场存在IHHNV单独感染。在所有受检样品中,均未检测到TSV,说明经过多年的防治,浙江省TSV的发病率已经降到了非常低的水平。本次采样地点选择在南美白对虾示范养殖基地,虾苗均为健康虾苗,此结果揭示WSSV和IHHNV的感染可能是在生长过程中因为病毒污染了养殖环境和不科学的养殖方法导致的。我们收集2008年浙江省爆发对虾白斑综合症的养殖场的对虾,根据WSSV基因组上高变区域:ORF23/24,ORF14/15和ORF94内的可变串连重复区域的变异特征,采用PCR及序列分析方法研究WSSV的不同基因型。根据上述变异区域,在我们收集的样品中鉴定了3个基因型,分别在ORF23/24和ORF14/15这两个重要的高变区呈现逐渐增大的缺失,缺失的核苷酸数分别达到了6238 bp、11093 bp和11788 bp。对ORF94的研究结果显示,54 bp的可变串联重复序列在该区域仍然显示出了多样性,但令人惊奇的是,我们发现来自嘉兴尖山、台州六鳌和台州沙柳养殖场的WSSV毒株缺失了整个ORF94区域。此外,我们成功增殖了一种基因型的WSSV毒株,为将来比较毒株的毒力差异测定奠定基础。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-8
引言  8-11
1 文献综述  11-23
  1.1 白斑综合症病毒的命名和分类地位  11-12
  1.2 WSSV的形态结构和病理特征  12-13
  1.3 对虾白斑综合症病毒的流行病学研究  13-14
    1.3.1 WSSV感染宿主范围  13
    1.3.2 WSSV主要传播途径  13-14
  1.4 白斑综合症病毒基因组的结构  14-16
  1.5 对虾白斑综合征病毒各分离株基因组的比较  16-19
    1.5.1 高变区ORF23/24  16-17
    1.5.2 高变区ORF14/15  17-18
    1.5.3 可变数目串连重复多态性  18-19
    1.5.4 WSSV-TW株的转录酶基因  19
    1.5.5 单核苷酸多态性  19
  1.6 WSSV分子流行病学研究  19-21
  1.7 本论文的研究内容和意义  21-23
2 我国浙东沿海地区对虾WSSV、IHHNV和TSV流行情况初步调查  23-30
  2.1 材料与方法  23-26
    2.1.1 对虾样品收集  23-24
    2.1.2 核酸提取  24-25
    2.1.3 PCR反应  25
    2.1.4 病毒检测  25-26
    2.1.5 测序与序列分析  26
  2.2 结果  26-28
  2.3 讨论  28-30
3 2008 年浙江省对虾白斑综合症病毒的分子流行病学研究  30-44
  3.1 材料与方法  30-33
    3.1.1 材料  30-31
    3.1.2 方法  31-33
  3.2 结果  33-42
    3.2.1 高变区ORF23/24  33-36
    3.2.2 高变区14/15  36-37
    3.2.3 ORF94 的可变数目串连重复多态性  37-40
    3.2.4 毒株基因分型总结  40-42
  3.3 讨论  42-44
4 病毒增殖  44-48
  4.1 材料与方法  44-45
    4.1.1 材料  44
    4.1.2 WSSV毒株的增殖  44
    4.1.3 电镜负染观察  44-45
    4.1.4 纯化病毒的浓度测定  45
  4.2 结果  45-47
    4.2.1 病毒的增殖  45
    4.2.2 病毒浓度的测定  45-46
    4.2.3 增殖病毒基因型检测  46-47
  4.3 讨论  47-48
5 结论  48-50
  5.1 浙江省WSSV，TSV和IHHNV感染情况初步调查  48
  5.2 WSSV分子流行病学分析  48
  5.3 不同WSSV基因型病毒增殖  48-49
  5.4 拟待解决的问题  49-50
6 参考文献  50-55
7 在学研究成果  55-56
8 致谢  56-57

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 甲壳类病虫害及其防治
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