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神经降压素的Fmoc固相合成

作　者: 景文鹏
导　师: 吴蕾
学　校: 天津商业大学
专　业: 发酵工程
关键词: 神经降压素固相多肽合成(SPPS) Fmoc合成策略反相高效液相色谱质谱
分类号: TQ464.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 75次
引　用: 1次
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内容摘要

神经降压素是由13个氨基酸残基组成的生物活性多肽,具有多重生理功能,且高活性、作用快速,可作为潜在的安定药、镇痛药和降压药等,具有广阔的应用前景。本研究主要进行了固相合成反应器的设计及合成工艺的优化。首先对手工固相合成仪（反应器）进行了设计、选择及优化,确定以振荡混合型反应器为本研究的最佳固相合成反应器。然后选择以Fmoc保护的氨基酸为原料,Wang树脂为载体,按照神经降压素的氨基酸序列Pyr-Leu-Tyr-Glu-Gln-Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-OH,从C端向N端进行合成,成功合成了神经降压素。考察了缩合试剂、脱保护试剂、切割试剂等条件对合成效果的影响,确定了优化的合成工艺:以DCM为反应溶剂,TBTU/HOBt/DIEA为缩合剂,采用TFA/H₂O/thioanisole/Phenol/EDT（82:5:5:6:2）的切割试剂的配方的切割条件,保护氨基酸2倍过量进行缩合反应,反应时间为3～12h。反应结果使神经降压素的收率达61.8%。此合成工艺操作简单、周期短、合成效率高、成本低、适合于规模化生产。建立了合成神经降压素粗产品的HPLC分析方法,研究了乙腈浓度梯度、乙腈起始浓度对分析效果的影响,并进行了神经降压素粗产品的LC/MS分析,检测分子量为1672.96,结果验证了合成的多肽为神经降压素。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
第一章前言  7-23
  1.1 神经降压素概述  7-11
  1.2 多肽固相合成的简介  11-19
  1.3 多肽的分离纯化  19-21
  1.4 多肤的质谱(MS)分析法  21-22
  1.5 本文研究的主要意义  22
  1.6 本文研究的主要内容  22-23
第二章材料与方法  23-33
  2.1 神经降压素的固相合成  23-27
  2.2 茚三酮-水杨醛检测自由氨基  27-29
  2.3 洗涤效果检测  29
  2.4 神经降压素合成后树脂的切割工艺  29-30
  2.5 神经降压素的色谱分析  30-33
第三章结果与讨论  33-57
  3.1 固相合成反应仪器的设计及完善  33-36
  3.2 缩合反应的容器前处理  36-37
  3.3 脱除氨基酸上Fmoc方案的确定  37-38
  3.4 洗涤效果的检测  38-40
  3.5 反应时间对缩合效果的影响  40-42
  3.6 树脂的切割实验  42-45
  3.7 自由氨基定量检测结果  45-47
  3.8 TBTU与DCC作为缩合剂的比较  47-48
  3.9 神经降压素全合成过程  48-49
  3.10 神经降压素的高效液相色谱法分析  49-52
  3.11 神经降压素粗品LC/MS分析  52-57
第四章结论  57-59
参考文献  59-64
发表论文、参加科研情况说明  64-65
致谢  65

神经降压素的Fmoc固相合成

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