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高浓度盐筛选农药降解菌研究
作 者: 熊海铮
导 师: 邓新平
学 校: 西南大学
专 业: 农药学
关键词: 降解菌 农药 耐盐菌株 降解菌筛选方法 生物修复
分类号: X172
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
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近年来,利用微生物降解农药、处理农药污染的研究,日益被人们所重视。筛选出高效降解菌,是此研究基础和重点,而筛选方法的合理性更是能否筛选出高效降解菌的关键。本文针对传统农药降解菌筛选方法中存在的一些弊端,对农药降解菌筛选方法进行了有创新和改良。以西南大学周边普通大田土壤为研究材料,通过使用高浓度NaCl筛选方法,分离得到多株耐盐株菌株,并以我国农田中广泛使用的几类农用化学物质为研究对象,对耐盐菌株的在一定浓度农药中生长及降解特性进行了初步探讨,为降解菌筛选方法的创新,提出了有益的参考。本研究主要结果如下:1耐盐菌株的筛选通过使用含有10%浓度NaCl的LB富集培养基对土壤中微生物进行筛选,分离出22株耐盐微生物,使用用含有15%浓度NaCl的LB培养基再次对22株耐盐菌株进行复筛得到6株极度耐盐菌株(el-e6),其它16株为中度耐盐菌株(m1-m16)。2耐盐菌株的耐药性检测分别使用四种农用化学物质对其抗药性进行检测,发现在200ppm药物浓度下,22株耐盐菌在48小时内生长被抑制,但效果并不明显,其最大生长量和所需时间均与不加药相差无儿,表现出较高的耐药性。说明耐盐菌对其他有毒害物质亦有耐受力。3耐盐菌株降解率研究通过对22株耐盐菌降解率的测定发现,在50mg/L药物浓度下,22株耐盐菌对四种农用化学物质均有一定的降解效果。在对广灭灵、高效氯氰菊酯、3,4-二氯苯胺、毒死蜱的处理2d后,中等耐盐菌株平均降解率分别为10.8%、39.5%、34.0%、28.6%。高耐盐菌株分别为25.1%、76.4%、83.9%、63.6%。可看出高耐盐居住的降解能力,远高于中等耐盐菌株,说明植株耐盐性与其降解效率有一定的相关关系。4对高耐盐菌株的鉴定及降解、生长研究通过对6株耐盐菌在50mg/L药物浓度下降解及生长对照曲线,可发现其降解效率可能受到菌株生长期和药物残留量两方面的影响:1)在菌株活性最强的对数生长期,菌株降解效率最高,而随着菌株生长进入衰亡期,其降解效率逐步降低。2)在药物残留量较高时,菌株降解效率较高,而随着药物残留量的减少,其降解效率也随之降低。符合一级动力学原理。通过16srRNA检测6株高耐盐农药降解菌株鉴定结果如下:el与蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus strain TAUC5相似性最高(>99.9%)e2、e4与地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis strain BPRIST006相似性最高(97.8%)e3与短小杆菌Bacillus pumilus sp. GN-6目似性最高(99.1%),e5与Uncultured Bacillus sp.相似性最高(97.9%)。e6通过鉴定与放线菌链霉菌Streptomyces sp.702(2011)相似性最高(98.6%)。
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全文目录
目录 5-7 摘要 7-9 Abstract 9-11 第1章 文献综述 11-23 1 农药污染现状及危害 11-12 1.1 对人体健康的危害 11-12 1.2 对农业生产的影响 12 1.3 对进出口贸易的影响 12 1.4 对土壤及农产品品质的影响 12 2 四种农用化学物质的使用情况及环境行为 12-15 2.1 广灭灵的降解特性及残留危害 12-13 2.2 高效氯氰菊酯的降解特性及残留危害 13-14 2.3 3,4-二氯苯胺的降解特性及残留危害 14 2.4 毒死蜱降解特性及残留危害 14-15 3 农药微生物降解研究现状 15-20 3.1 生物修复 15 3.2 降解农药的微生物种类 15-16 3.3 微生物降解农药原理 16 3.4 传统农药降解菌获得方法及优缺点 16-18 3.5 传统降解菌在实际应用中的效果 18-19 3.6 现代农药降解菌的成果 19-20 4 农药的检测及菌种的鉴定 20-23 4.1 农药残留的检测方法 20-22 4.2 细菌的鉴定分类 22-23 第二章 耐盐菌的筛选、分离及耐药性检测 23-33 1 材料与方法 23-24 1.1 菌种来源 23 1.2 仪器与试剂 23 1.3 培养基的制备 23-24 1.4 耐盐菌的筛选分离及纯化 24 1.5 耐盐菌株的耐药性检测 24 2 结果与分析 24-30 2.1 耐盐菌株的初筛 24-25 2.2 耐盐菌的复筛 25-26 2.3 耐盐菌株耐药性实验 26-30 3 结果与讨论 30-33 3.1 土壤的选取 30 3.2 菌种的筛选 30 3.3 农药耐药性的检测 30-33 第3章 22株耐盐菌降解效果的测定 33-43 1 材料与方法 33-35 1.1 仪器与试剂 33 1.2 处理设计 33-34 1.3 色谱检测 34-35 2 结果与分析 35-39 2.1 色谱体系的建立 35-37 2.2 不同菌株对4种药剂的降解效果 37-39 3. 结论与讨论 39-43 3.1 实验方法和条件 39-40 3.2 降解能力的讨论 40-43 第4章 6株高耐盐菌降解能力及其种类鉴定 43-61 1 材料与方法 43-44 1.1 仪器与试剂 43 1.2 处理设计 43 1.3 色谱检测 43-44 2 结果与分析 44-59 2.1 6株耐盐菌对4种药剂的降解及在其中的生长状况 44-53 2.2 菌株16srRNA鉴定结果 53-59 3 结论与讨论 59-61 3.1 降解时间的确定 59 3.2 降解结果的讨论 59-61 总结与展望 61-63 参考文献 63-71 硕士研究生期间发表的论文 71-73 致谢 73
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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境科学基础理论 > 环境生物学 > 环境微生物学
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