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猪感染戊肝病毒后体内抗体与抗原相关性及病毒准种现象研究

作　者: 张西营
导　师: 王振勇
学　校: 山东农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 戊型肝炎病毒准种系统进化树分析
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 33次
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内容摘要

戊型肝炎(Hepatitis HE)对人类健康具有很大的危害,是典型的急性和爆发型肝炎。戊型肝炎的病原体为戊型肝炎病毒(Hepatitis Evirus,HEV),目前HEV分为4个主要的基因型:1型主要分布于亚洲和非洲,2型分布于墨西哥,3型主要分布于美国和欧洲国家,但近些年也发现存在于日本、韩国、中国大陆和台湾,4型包括从人和猪上分离的中国株、中国台湾株以及部分日本株。猪在动物宿主中感染率最高,病毒载量最大,因此,被认为是HEV最主要的动物贮存宿主。而且从中分离到的病毒和人源毒株也有较高的同源性。为了摸清猪群中感染HEV后个体的机制、病毒持续存在的情况以及它们在猪群中的演变规律,我们进行了以下研究。首先,为研究猪戊肝病毒是否存在准种现象,采用逆转录-巢式聚合酶链反应法(RT-nested-PCR)对4株猪戊肝病毒第2可读框(ORF2)部分序列进行PCR扩增,将产物克隆后,每个毒株分别随机挑取20个阳性克隆测序,进行DNA序列分析。结果显示4株HEV不同克隆间的ORF2核苷酸序列同源性分别为96.8%~99.7%、98.8%~99.7%、98.8%~99.7%和100%,有变异的克隆核苷酸序列与上海株(SAAS-JDY5)同源性为96.8%~100%。由此证实感染戊肝病毒的猪个体内存在HEV准种。第二部分的研究是感染HEV的猪体内抗体和抗原消长规律。结果表明猪个体感染HEV后,抗体的水平要持续很长一段时间,并且有的个体在第24周时抗体可维持较高的水平。对血清中的HEV RNA检测发现,一般仅存在2~3三周左右,但粪便的HEV RNA持续的时间较长,最长可持续16周左右。为了探索抗体、抗原的关系和准种存在情况,分别在崇明某猪场采集2月龄猪血清样品30份和浦东某猪场采集1~2年母猪血清样品、粪便样品各50份。结果发现在高抗体水平下血清和粪便中一样存在HEV RNA,而且粪便中的HEV RNA阳性率要高于血清中的HEV RNA阳性率。同时,在我们调查的血清和粪便HEV RNA阳性样品中,血清中都没有发现有准种现象,但在粪便中有准种现象。

全文目录

中英文缩略词表  4-7
摘要  7-9
Abstract  9-11
引言  11-30
  一、戊型肝炎病毒研究进展  11-27
    1 病原学  12
    2 HEV 的分子生物学  12-18
    3 戊型肝炎的流行病学  18-22
    4 HEV 的传染途径  22-24
    5 HEV 的细胞培养  24-25
    6 戊型肝炎的实验室诊断  25-26
    7 戊型肝炎疫苗的研究  26-27
  二、病毒准种研究进展  27-30
    1 病毒准种的特性  27-28
    2 病毒准种产生的原因  28
    3 准种株的量化  28-29
    4 HEV 准种研究情况  29-30
实验一猪戊肝病毒存在准种现象  30-43
  1 材料与方法  30-36
    1.1 材料  30-31
    1.2 方法  31-36
  2 结果  36-40
    2.1 HEV RNA RT-nested-PCR 检测结果  36
    2.2 HEV ORF2 部分序列重组质粒的酶切鉴定  36-37
    2.3 HEV ORF2 部分核苷酸序列比较分析  37-38
    2.4 氨基酸序列比对  38-39
    2.5 进化树分析  39-40
  3 讨论  40-43
实验二自然感染HEV 猪个体内抗体消长和病毒RNA 的跟踪调查  43-50
  1 材料与方法  43-46
    1.1 材料  43-44
    1.2 方法  44-46
  2 结果  46-49
    2.1 部分血清和粪便的RNA 检测结果  46
    2.2 四头猪 HEV 总抗体的检测结果  46-47
    2.3 四头猪血液和粪便里的HEV RNA 检测结果  47-49
  3 讨论  49-50
实验三戊肝病毒抗体与抗原相关性及病毒准种现象研究  50-62
  1 材料和方法  50-51
    1.1 材料  50-51
    1.2 方法  51
  2 结果  51-59
    2.1 崇明某猪场血清中抗原与抗体检测的结果  51-52
    2.2 浦东某猪场血清和粪便中抗原与抗体的检测结果  52
    2.3 血清和粪便的RNA 检测结果  52-54
    2.4 核苷酸序列分析  54-59
    2.5 血清和粪便阳性样品中的准种存在情况  59
  3 讨论  59-62
结论  62-63
参考文献  63-70
附录  70-71
致谢  71-72
攻读学位期间发表的学术论文目录  72

猪感染戊肝病毒后体内抗体与抗原相关性及病毒准种现象研究

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