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江西省HBV基因变异情况及其与慢性乙肝临床表现和抗病毒疗效关系的研究

作　者: 张华
导　师: 温志立
学　校: 南昌大学
专　业: 内科学
关键词: 乙型肝炎乙型肝炎病毒基因型多对型特异性引物巢式PCR 乙型肝炎病毒基因型基因亚型 Ba Bj 准种拉米夫定熔点曲线耐药
分类号: R450
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

第一部分采用多对型特异型引物巢式PCR法检测江西省HBV基因型分布及其与乙型病毒性肝炎临床关系的研究目的:了解江西省慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况,HBV基因型与临床的关系。方法:选择HBV-DNA阳性的江西籍慢性乙型肝炎患者血清150份,患者分别诊断为慢性HBV携带者、慢性肝炎轻度、中度、重度和慢性重型肝炎,每组30例,采用多对型特异性引物巢式PCR法检测HBV基因型。结果:本组慢性乙型肝炎患者HBV基因分型结果为B型118例(78.7%),C型31例(20.7%), D型1例(0.6%);在上述5组患者中C型比例分别为0%,16.7%,26.7%,30.0%和30.0%,其中慢性HBV携带者与其他组比,差异有统计学意义(P<0.05);B、C两基因型患者HBeAg阳性率分别为83.9%(99/118)和90.3%(28/31),HBeAb阳性率分别为16.1%(19/118)和9.7%(3/31),差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:江西地区HBV优势基因型以B型为主,C型次之,有少量的D型感染者。C基因型HBV引起疾病的临床病情较B型严重。第二部分巢式PCR-RFLP法对江西省乙型肝炎病毒Bj和Ba 基因亚型的初步鉴定目的:通过检测江西省乙型肝炎病毒(HBV)基因亚型(Ba和Bj)的分布情况,了解HBV基因亚型与HBV致病性的关系,希望能藉此阐述相同基因型HBV可导致不同病情的机制。方法:随机选取经多对型特异性引物巢式PCR法鉴定为B基因型HBV的血清标本60例,包括慢性HBV携带者30例,慢性乙型肝炎患者各30例,采用巢式PCR-RFLP法鉴定其基因亚型(Ba和Bj)。结果:60例B型HBV经鉴定均为Ba型,没有发现Bj型。结论:江西省B基因型HBV可能主要为Ba亚型。相同基因型导致不同病情的机制可能还与其他因素如准种有关。第三部分熔点曲线法研究拉米夫定临床耐药与HBV准种相关性目的:研究HBV准种与拉米夫定耐药的关系,指导临床用药。方法:随机选取经拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者,治疗前30例,治疗后发生HBV变异30例,病毒反弹但经检测未发生变异30例,HBV P区经聚合酶链反应扩增后再采用熔点曲线法分析HBV准种数量。同时也对HBV C区、S区准种进行对比。结果:拉米夫定治疗前患者体内HBV P区准种数量为8.37±0.93个,病毒反弹组准种数量为5.30±0.95个,病毒变异组准种数量2.50±0.86个。三组间两两比较,P均小于0.05。HBV C区治疗前组准种数量为6.33±1.64个,病毒反弹组准种数量为6.37±1.81个,病毒变异组准种数量6.10±1.86个。三组间两两比较,P均大于0.05。HBV S区治疗前组准种数量为5.77±2.11个,病毒反弹组准种数量为6.17±1.93个,病毒变异组准种数量5.23±1.85个。三组间两两比较,P均大于0.05。结论:在拉米夫定的作用下HBV P区准种数量逐渐减少,发生变异后劣势耐药病毒株变为优势病毒株易检测到。拉米夫定对HBV C区、S区作用不明显。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-11
引言  11-14
第一部分 HBV 基因型与乙型病毒性肝炎临床关系的研究  14-21
  1.1 研究对象  14
  1.2 材料  14-16
  1.3 方法  16-17
  1.4 统计学处理  17-18
  1.5 结果与分析  18-21
第二部分巢式PCR-RFLP法对乙型肝炎病毒Bj和Ba 基因亚型的初步鉴定  21-25
  2.1 研究对象  21
  2.2 材料  21-22
  2.3 方法  22-23
  2.4 结果  23-25
第三部分采用熔点曲线监测拉米夫定治疗的乙肝患者体内HBV 准种变化的研究  25-42
  3.1 熔点曲线法中 2%SYBR Green I 荧光染料最佳浓度的确定  25-30
  3.2 熔点曲线法研究拉米夫定临床耐药与 HBV P 区准种相关性  30-34
    3.2.1 研究对象  30
    3.2.2 材料  30-31
    3.2.3 主要方法  31
    3.2.4 统计学处理  31
    3.2.5 结果  31-34
  3.3 熔点曲线法研究拉米夫定临床耐药与HBV C 区准种相关性  34-37
    3.3.1 研究对象  34
    3.3.2 材料  34
    3.3.3 引物  34-35
    3.3.4 主要方法  35
    3.3.5 统计学处理  35
    3.3.6 结果  35-37
  3.4 熔点曲线法研究拉米夫定临床耐药与HBV S 区准种相关性  37-42
    3.4.1 研究对象  37-38
    3.4.2 材料  38
    3.4.3 引物  38
    3.4.4 主要方法  38
    3.4.5 统计学处理  38-39
    3.4.6 结果  39-42
讨论  42-48
  一、采用多对型特异型引物巢式 PCR 法检测江西省 HBV 基因型与乙型病毒性肝炎临床关系的研究  42-43
  二、巢式 PCR-RFLP 法对江西省乙型肝炎病毒 Bj 和 Ba 基因亚型的初步鉴定  43-45
  三、采用熔点曲线监测拉米夫定治疗的乙肝患者体内 HBV 准种变化的研究  45-48
结论  48-49
致谢  49-50
参考文献  50-55
综述  55-72
攻读硕士学位期间的成果  72

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