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组织工程化类金刚石涂层瓣膜构建及其体内植入的初步研究

作　者: 李大刚
导　师: 严中亚
学　校: 安徽医科大学
专　业: 外科学
关键词: 类金刚石组织工程犬内皮细胞生物相容性机械瓣膜体外培养一氧化氮
分类号: R654.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景:心脏瓣膜病变是最常见的一种心脏病,全世界每年约有25万人通过手术置换心脏瓣膜,中国专家估计按医学临床标准,中国至少有一百万人需要手术置换瓣膜。现在临床上应用最广泛的瓣膜为全低温各向同性碳双叶瓣,但是因植入后需终身抗凝,抗凝不当易造成出血、血栓形成及栓塞,严重影响患者生活质量,且价格昂贵等不利因素限制其应用。组织工程学的发展为实现构建新一代优质的瓣膜提供了可能,现阶段尚未发现可降解材料中有完全适合瓣膜构建的材料,而脉冲激光法沉积的类金刚石薄膜与低温各向同性碳同为非晶体碳材料,因DLC良好的物理特性和生物相容性,且制作简单,成为现阶段构建组织工程化瓣膜的可选材料之一。目的:探讨原代培养的犬静脉血管内皮细胞(CVEC)与脉冲激光法(PLD)沉积的DLC瓣膜生物相容性,体外法用CVEC和DLC构建完全内皮化的组织工程化瓣膜(TEHV),体内法对植入TEHV的血液和组织相容性进行评价。方法:取生长6个月健康犬8只,雌雄不限,体重10～15Kg,对其1～8进行编号,麻醉后取前肢隐静脉血管内皮细胞做原代培养,用Ⅷ相关抗原抗体反应进行免疫荧光观察来验证细胞来源,细胞在体外培养传至2~3代做为种子细胞备用,对16枚PLD法沉积的DLC瓣膜分为8组并A~P进行编号,每只实验犬培养的种子细胞种植在一组(2枚)瓣膜上,并设立空白对照组,进行细胞种植培养,倒置显微镜观察。取第1、3、5、7天培养的上清液进行NO浓度测定比较,于培养第5、9天各取每组1枚DLC瓣膜材料行电镜扫描,剩余DLC瓣膜等完全内皮化后植入对应编号的实验犬体内,饲养8周后处死实验犬,用SEM进行观察DLC瓣膜细胞生长情况,并取DLC瓣膜紧密接触心内膜和正常心内膜HE染色比较。结果:,手术取的血管细胞经Ⅷ因子相关抗原抗体验证细胞来源为内皮细胞,犬隐静脉血管内皮细胞可经体外培养大量增殖,可做为种子细胞进行组织工程化构建。DLC瓣膜组与空白对照组在NO浓度分泌上(P>0.05)两者无统计学差异。SEM扫描见第5、9天DLC瓣膜上细胞粘附紧密,细胞伪足延伸良好,细胞间互相连接并有融合。植入体内的DLC瓣膜SEM观察可见有大量内皮样细胞融合,心内膜HE染色观察两组未见明显差异。结论:原代培养的犬静脉血管内皮细胞可做为组织工程化瓣膜研究的种子细胞。PLD法沉积DLC瓣膜与CVEC在体外一起培养显示出良好的生物相容性,可以构建出完全内皮化的组织工程化瓣膜,体内植入后也显示出良好的血液和组织相容性。

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英文缩略词表 5-6中文摘要 6-8Abstract 8-10引言 10-15第一部分 15-33 材料与方法 15-20 结果 20-29 讨论 29-32 结论 32-33第二部分 33-41 材料与方法 33-35 结果 35-38 讨论 38-40 结论 40-41参考文献 41-44附录 44-45致谢 45-46综述 46-53 参考文献 51-53

组织工程化类金刚石涂层瓣膜构建及其体内植入的初步研究

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