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乳腺癌细胞株MCF-7诱导血小板聚集机制

作　者: 练炼
导　师: 陶敏
学　校: 苏州大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 血小板 血行转移 TCIPA TXA2 ADP 膜糖蛋白受体
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:探讨人乳腺癌细胞MCF-7诱导血小板聚集的机制,为今后可能通过抗血小板治疗来抗肿瘤转移提供理论依据。方法:1.应用不同浓度MCF-7细胞诱导血小板聚集(Tumor cell-induced platelet aggregation, TCIPA),并用四种不同的血小板活化途径抑制剂阿司匹林、Apyrase、7E3、SZ-1干预MCF-7细胞诱导的TCIPA。2.应用血小板聚集仪检测血小板聚集率。3.应用相差显微镜观察TCIPA现象以及血小板活化途径抑制剂干预后的TCIPA细胞细胞形态变化。4.应用流式细胞术检测TCIPA及干预过程中血小板、肿瘤细胞表面GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb的表达,并分析该过程中不同时间点血小板聚集率及血小板膜GPⅡb/Ⅲa和GPⅠb的相关性。5.应用ELISA法检测TCIPA及干预过程中TXB2的生成。结果:1.0 ,0.05×106/ml,0.5×106/ml,1×106/ml,5×106/ml,50×106/ml六个不同浓度组MCF-7细胞诱导的血小板最大聚集率分别为0;7.7±0.5%;21.7±1.2%;28.5±1.5%;43.3±1.7%;44.5±1.3%。0~5×106/ml这五个浓度组诱导的血小板最大聚集率逐渐升高(P<0.05);当浓度从5×106/ml升至50×106/ml时血小板最大聚集率未显著升高(P>0.05)。相差显微镜亦观察到MCF-7细胞诱导的血小板聚集现象。2.MCF-7诱导TCIPA至50%最大聚集率时,血小板膜表面GPⅡb/Ⅲa及GPⅠb的表达量为853±124,137±21;MCF-7细胞表面GPⅡb/Ⅲa及GPⅠb的表达量为178±22,344±53,较对照组(未诱导组)均显著上调(P均<0.05)。TCIPA过程中各时间点血小板聚集率与血小板膜GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb的表达均呈正相关(r=0.968,P<0.05;r=0.998,P<0.05);GPⅡb/Ⅲa与GPⅠb的表达亦呈正相关(r=0.971,P<0.05)。MCF-7诱导的TCIPA过程中TXB2的生成量为79.5±7.9,较对照组TXB2的生成量71.8±9.7无显著性变化(P>0.05)。3.阿司匹林干预组TCIPA最大聚集率为43.3±1.5%,与对照组(43.3±1.7%)相比,无显著的抑制作用(P>0.05),Apyrase、7E3、SZ-1干预组TCIPA最大聚集率分别为21.5±1.3,30.4±1.8,26.7±1.2(%),与对照组(43.3±1.7%)相比,均显著抑制了MCF-7细胞诱导的TCIPA(P均<0.05)。各抑制剂联合干预组Apyrase+7E3,Apyrase+SZ-1,7E3+SZ-1,Apyrase+7E3+SZ-1,TCIPA最大聚集率分别为:20.5±1.2;17.7±1.1;16.9±1.5;11.7±1.2(%),与对照组(43.3±1.7%)相比,均显著抑制了MCF-7细胞诱导的TCIPA(P均<0.05),两抑制剂联合组比各单抑制剂组具有更显著抑制作用(P均<0.05),三抑制剂联合组比各两抑制剂联合组具有更显著抑制作用(P均<0.05)。相差显微镜观察到使用了聚集抑制剂干预TCIPA过程后,血小板聚集团块数量及体积明显减小。4.血小板膜表面GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb荧光强度在TCIPA活化干预组分别为(532±40%,117±10%)较TCIPA活化组(853±124%,137±21%)显著降低(P均<0.05)。MCF-7细胞表面GPⅡb /Ⅲa、GPⅠb荧光强度TCIPA活化干预组分别为(164±10%,336±54%)较TCIPA活化组(178±22%,344±53%)无显著性差异(P均>0.05)。各活化途径抑制剂对TCIPA过程中TXB2的生成几乎没有影响(F=1.45,P>0.05)。结论:1.人乳腺癌细胞MCF-7能够以浓度依赖方式诱导血小板发生聚集反应(TCIPA)。2.在MCF-7诱导的TCIPA过程中,血小板表面GPⅡb/Ⅲa及GPⅠb的表达显著上调,应用ADP-,GPⅡb/Ⅲa -,GPⅠb -Ⅸ-活化途径抑制剂能够抑制MCF-7诱导的TCIPA,联合使用以上活化途径抑制剂能够起到更显著的抑制作用。提示血小板ADP-,GPⅡb /Ⅲa -,GPⅠb -Ⅸ-这三条活化途径可能共同参与了MCF-7诱导的TCIPA过程。3.在MCF-7诱导的TCIPA过程中,TXB2的生成无显著性变化,应用TXA2-活化途径抑制剂阿司匹林未能抑制MCF-7诱导的TCIPA,也未见TXB2浓度改变。提示TXA2-活化途径可能在MCF-7诱导的TCIPA过程中不起重要作用。

全文目录


中文摘要  4-7
Abstract  7-11
引言  11-13
材料  13-15
方法  15-21
结果  21-34
讨论  34-41
结论  41-42
参考文献  42-46
血小板与肿瘤转移  46-59
攻读学位期间公开发表的论文  59-60
中英文对照缩略词表  60-61
致谢  61-62

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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